血管內(nèi)皮生長因子受體1在高糖所致足細(xì)胞胰島素抵抗和損傷中的研究.pdf

1、目的：探討血管內(nèi)皮生長因子受體1（Vascular endothelial growth factor receptor1，VEGFR1）在高糖所致足細(xì)胞胰島素抵抗和損傷中的作用及機(jī)制。
　　方法：1.以癌旁正常腎組織為對(duì)照，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)糖尿病腎病患者腎組織活檢標(biāo)本腎小球VEGFR1蛋白表達(dá)改變；2.Western blot方法分別檢測(cè)鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ）誘導(dǎo)的糖尿病腎病小鼠腎皮質(zhì)及體外高糖培養(yǎng)

2、條件永生化人足細(xì)胞VEGFR1蛋白表達(dá)較對(duì)照組改變；3.體外培養(yǎng)人足細(xì)胞系，以葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)觀察VEGFR1抑制劑GNQWFI（200μg/L）干預(yù)對(duì)胰島素刺激下足細(xì)胞葡萄糖攝取的影響，免疫熒光及Western blot檢測(cè)GNQWFI干預(yù)對(duì)足細(xì)胞膜蛋白葡萄萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（Glucose transporter type-4，GLUT-4）表達(dá)分布的影響，Western blot檢測(cè)足細(xì)胞胰島素受體底物1（Insulin recepto

3、r substrate-1，IRS-1）磷酸化活性蛋白表達(dá)改變；4.以慢病毒為載體，體外轉(zhuǎn)染si-RNA敲低足細(xì)胞VEGFR1蛋白表達(dá)，Western blot方法檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染效率；5.體外培養(yǎng)人足細(xì)胞系，分別以siRNA轉(zhuǎn)染敲低VEGFR1蛋白表達(dá)或GNQWFI干預(yù)抑制VEGFR1蛋白活性，Western blot方法檢測(cè)高糖（HG30mmol/L）刺激24小時(shí)后，足細(xì)胞細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（Extracellular signal-reg

4、ulated kinase，ERK）1/2通路磷酸化活性蛋白，及足細(xì)胞損傷標(biāo)志物desmin蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組的改變；6.飼養(yǎng)8周齡野生型雄性C57BL／6J小鼠30只，隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組（Ctrl組），糖尿病腎病模型組（DN組），糖尿病腎病VEGFR1抑制劑干預(yù)組（DN+GNQWFI組）；每組各10只。一次性腹腔注射STZ（135mg/kg）建立糖尿病腎病小鼠模型。DN+GNQWFI組小鼠每天皮下注射GNQWFI(200μg/

5、L)1次連續(xù)15天。12周后代謝籠留取各組小鼠24小時(shí)尿液，檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白、尿白蛋白；取小鼠靜脈血測(cè)血清肌酐、血尿素氮含量；取部分腎皮質(zhì)以Western blot方法檢測(cè)Erk1/2、p38磷酸化蛋白及 desmin蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.糖尿病腎病患者腎小球VEGFR1較正常腎組織表達(dá)水平增高；2.糖尿病腎病模型小鼠腎皮質(zhì)VEGFR1表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高，高糖刺激條件永生化人足細(xì)胞后，VEGFR1表達(dá)明顯上調(diào)；3.

6、抑制VEGFR1可減少足細(xì)胞葡糖攝取及細(xì)胞膜表面GLUT-4蛋白表達(dá)，降低足細(xì)胞IRS-1活性蛋白表達(dá)；4.與Scramble siRNA組相比，VEGFR1 si-RNA轉(zhuǎn)染可有效敲低足細(xì)胞VEGFR1蛋白表達(dá)；5.高糖刺激可導(dǎo)致足細(xì)胞胰島素關(guān)鍵信號(hào)通路ERK1/2及p38活性磷酸化蛋白表達(dá)上調(diào)；敲低VEGFR1蛋白表達(dá)或抑制其活性可部分緩解高糖刺激所致足細(xì)胞胰島素信號(hào)通路蛋白表達(dá)改變；6.與正常對(duì)照組相比，糖尿病腎病組小鼠腎皮質(zhì)ER