越鞠甘麥大棗湯對產后抑郁模型小鼠的快速抗抑郁作用及機制研究.pdf

1、目的:
　　本研究以慢性孕前應激誘導構建產后抑郁（postpartum disease，PPD）小鼠模型，評估母鼠的產后抑郁樣行為。檢測精神分裂癥斷裂基因1(Disrupted in schizophrenia1，DISC1)在產后抑郁母鼠海馬腦區(qū)的基因表達變化，探討孕前應激對母鼠海馬腦區(qū)DISC1-Akt-mTOR信號通路蛋白表達的影響，以及對于海馬齒狀回神經發(fā)生、神經內分泌的影響，揭示孕前應激誘導產后抑郁樣行為的分子機制。觀察

2、中藥越鞠甘麥大棗湯（越甘）單次給藥對產后抑郁母鼠的快速抗抑郁作用，通過檢測越甘對PPD母鼠海馬DISC1-Akt-mTOR信號通路蛋白表達的影響，從DISC1信號通路探討中藥越甘發(fā)揮快速治療產后抑郁癥的分子機制，從而為產后抑郁的預防治療及新藥研發(fā)提供科學的理論依據和實驗依據。
　　方法:
　　1.將Balb/c小鼠隨機分為2組，空白對照組不給予任何刺激，對照組小鼠給予慢性孕前應激，連續(xù)造模3周。應激結束后，空白對照組及對照組

3、隨機取小鼠雌雄合籠交配懷孕，分娩后形成4組:空白對照組、普通應激組、普通分娩組以及應激合并分娩組即PPD模型組。于分娩后3周，檢測四組小鼠行為學，包括曠場實驗(Open field test，OFT)、強迫游泳測試(forced swimming test，FST)、蔗糖消耗測試(sucrose preference test，SPT)、懸尾測試(Tail suspension test，TST)及陌生環(huán)境攝食抑制實驗(novelty

4、suppressed feeding test，NSFT)，并計算分娩后模型組母鼠與普通分娩組的產仔量及仔鼠的存活率，以評價造模是否成功。此外，檢測四組小鼠產后12周的行為學，以評價模型是否具有持久穩(wěn)定性。
　　2.產后3周，行為學檢測結束后，取上述四組的母鼠海馬組織，以實時熒光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR，Q-PCR)法和western blotting檢測海馬腦區(qū)DISC1的基因及蛋白表達，

5、western blotting法檢測NR1、Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1、GluR1的蛋白表達情況;取各組母鼠的血清采用ELISA法檢測雌二醇(estradiol，E2)和(皮質酮corticosterone，CORT)的水平了解產后抑郁母鼠的內分泌情況;采用免疫組織化學法檢測檢測海馬神經再生情況。
　　3.模型構建成功后，模型組母鼠隨機分為3組，PPD模型組、YG組和Ket組。在產后第20天，YG組單次給予越鞠

6、甘麥大棗湯（越甘），空白對照組和PPD模型組單次給予生理鹽水，Ket組以單次西藥氯胺酮設為陽性參照組。給藥24小時后，進行行為學檢測，以評估藥物對于PPD動物模型抑郁樣行為的快速干預作用。此外，檢測單次給藥5天后的動物行為學變化，以評估藥物干預作用的持久性。
　　4.藥物干預24小時動物的行為學測試結束后，取四組的母鼠海馬組織，檢測海馬腦區(qū)DISC1的蛋白表達以及NR1、Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1、GluR1的蛋

7、白表達情況，研究中藥越甘發(fā)揮快速抗抑郁作用的神經分子機制。
　　結果:
　　1.孕前應激誘導產生的PPD模型小鼠表現出一系列抑郁樣表型。產后3周，與空白對照組比較，模型組母鼠的糖水消耗顯著降低;在強迫游泳測試及懸尾測試中，模型組母鼠不動時間顯著增加;模型組母鼠攝食潛伏時間明顯增加而單位時間攝食量顯著減少;空白對照組與普通應激組、普通分娩組之間無統計學差異。模型組母鼠的仔鼠分娩數目顯著減少，分娩后3周離乳后仔鼠的存活率也顯著下

8、降。此外，行為學實驗發(fā)現PPD模型小鼠到產后12周仍然表現出一系列抑郁樣行為。
　　2.產后3周，產后抑郁模型組母鼠海馬DISC1的蛋白表達及mRNA表達較空白對照組相比均顯著升高;與空白對照組相比，NR1的蛋白表達明顯上調而磷酸化的Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1及突觸后膜蛋白GIuR1的蛋白表達均顯著下調;此外，與空白對照組相比，模型組母鼠海馬齒狀回神經元細胞的增殖顯著減少;空白對照組與普通應激組、普通分娩組之間無

9、統計學差異;模型組母鼠血清的E2及CORT水平與對照組相比則無明顯統計學差異。
　　3.單次給予越甘24小時后，與PPD母鼠模型組相比，越甘組的糖水消耗顯著增加，絕望不動時間明顯降低，陌生環(huán)境攝食抑制實驗中的潛伏時間顯著縮短，單位時間攝食量明顯增加，均表現出與西藥氯胺酮相似的結果。給藥5天后，與PPD模型組相比，越甘組對模型小鼠抑郁樣行為的逆轉干預作用依然存在。
　　4.單次給予越甘24小時后，與模型組母鼠相比，越甘組母鼠海

10、馬DISC1的蛋白表達顯著下調，NR1的表達也明顯下調，而磷酸化的Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1及突觸后膜蛋白GluR1均顯著上調，與氯胺酮的結果相一致。
　　結論:
　　1.慢性孕前應激誘導的Bal b/c母鼠產后呈現出一系列抑郁樣癥狀，表型顯著且持久穩(wěn)定。小鼠表現為快感缺失、絕望不動時間延長、伴有焦慮以及母愛關懷行為減少等，并且癥狀可持續(xù)到產后12周，顯著地反映出產褥期抑郁障礙的行為表現。
　　2.產

11、后3周，孕前應激誘導的產后抑郁模型小鼠海馬腦區(qū)DISC1-Akt-mTOR通路表達異常。小鼠海馬DISC1蛋白表達及mRNA表達均異常升高，表明其與產后抑郁癥的發(fā)病密切相關。模型小鼠海馬NR1的蛋白表達上調，而Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1及突觸后膜蛋白GluR1的蛋白表達顯著下調，表明孕前應激通過DISC1及NR1介導的活化而抑制了Akt-mTOR的活性，進而抑制了下游底物p70s6k及4E-BP1的活性，降低了突觸后膜

12、蛋白GluR1的神經可塑性調節(jié)，減少了新生神經細胞的發(fā)生以及神經元的保護和存活，促進了產后抑郁癥的發(fā)生。
　　3.中藥越甘在PPD小鼠模型上發(fā)揮了快速且持久的抗抑郁作用，與氯胺酮相似。中藥越甘單次給藥24小時后能夠顯著增加產后抑郁模型母鼠的蔗糖消耗量，降低其在強迫游泳及懸尾測試中的不動時間，在陌生環(huán)境攝食抑制實驗中減少潛伏時間并增加單位時間的攝食量，并且上述作用可以至少維持5天。
　　4.調控海馬DISC1-Akt-mTOR