越鞠甘麥大棗湯對(duì)產(chǎn)后抑郁模型小鼠的快速抗抑郁作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　本研究以慢性孕前應(yīng)激誘導(dǎo)構(gòu)建產(chǎn)后抑郁（postpartum disease，PPD）小鼠模型，評(píng)估母鼠的產(chǎn)后抑郁樣行為。檢測(cè)精神分裂癥斷裂基因1(Disrupted in schizophrenia1，DISC1)在產(chǎn)后抑郁母鼠海馬腦區(qū)的基因表達(dá)變化，探討孕前應(yīng)激對(duì)母鼠海馬腦區(qū)DISC1-Akt-mTOR信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響，以及對(duì)于海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)內(nèi)分泌的影響，揭示孕前應(yīng)激誘導(dǎo)產(chǎn)后抑郁樣行為的分子機(jī)制。觀察

2、中藥越鞠甘麥大棗湯（越甘）單次給藥對(duì)產(chǎn)后抑郁母鼠的快速抗抑郁作用，通過(guò)檢測(cè)越甘對(duì)PPD母鼠海馬DISC1-Akt-mTOR信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響，從DISC1信號(hào)通路探討中藥越甘發(fā)揮快速治療產(chǎn)后抑郁癥的分子機(jī)制，從而為產(chǎn)后抑郁的預(yù)防治療及新藥研發(fā)提供科學(xué)的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.將Balb/c小鼠隨機(jī)分為2組，空白對(duì)照組不給予任何刺激，對(duì)照組小鼠給予慢性孕前應(yīng)激，連續(xù)造模3周。應(yīng)激結(jié)束后，空白對(duì)照組及對(duì)照組

3、隨機(jī)取小鼠雌雄合籠交配懷孕，分娩后形成4組:空白對(duì)照組、普通應(yīng)激組、普通分娩組以及應(yīng)激合并分娩組即PPD模型組。于分娩后3周，檢測(cè)四組小鼠行為學(xué)，包括曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)(Open field test，OFT)、強(qiáng)迫游泳測(cè)試(forced swimming test，F(xiàn)ST)、蔗糖消耗測(cè)試(sucrose preference test，SPT)、懸尾測(cè)試(Tail suspension test，TST)及陌生環(huán)境攝食抑制實(shí)驗(yàn)(novelty

4、suppressed feeding test，NSFT)，并計(jì)算分娩后模型組母鼠與普通分娩組的產(chǎn)仔量及仔鼠的存活率，以評(píng)價(jià)造模是否成功。此外，檢測(cè)四組小鼠產(chǎn)后12周的行為學(xué)，以評(píng)價(jià)模型是否具有持久穩(wěn)定性。
　　2.產(chǎn)后3周，行為學(xué)檢測(cè)結(jié)束后，取上述四組的母鼠海馬組織，以實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR，Q-PCR)法和western blotting檢測(cè)海馬腦區(qū)DISC1的基因及蛋白表達(dá)，

5、western blotting法檢測(cè)NR1、Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1、GluR1的蛋白表達(dá)情況;取各組母鼠的血清采用ELISA法檢測(cè)雌二醇(estradiol，E2)和(皮質(zhì)酮corticosterone，CORT)的水平了解產(chǎn)后抑郁母鼠的內(nèi)分泌情況;采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)檢測(cè)海馬神經(jīng)再生情況。
　　3.模型構(gòu)建成功后，模型組母鼠隨機(jī)分為3組，PPD模型組、YG組和Ket組。在產(chǎn)后第20天，YG組單次給予越鞠

6、甘麥大棗湯（越甘），空白對(duì)照組和PPD模型組單次給予生理鹽水，Ket組以單次西藥氯胺酮設(shè)為陽(yáng)性參照組。給藥24小時(shí)后，進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，以評(píng)估藥物對(duì)于PPD動(dòng)物模型抑郁樣行為的快速干預(yù)作用。此外，檢測(cè)單次給藥5天后的動(dòng)物行為學(xué)變化，以評(píng)估藥物干預(yù)作用的持久性。
　　4.藥物干預(yù)24小時(shí)動(dòng)物的行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后，取四組的母鼠海馬組織，檢測(cè)海馬腦區(qū)DISC1的蛋白表達(dá)以及NR1、Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1、GluR1的蛋

7、白表達(dá)情況，研究中藥越甘發(fā)揮快速抗抑郁作用的神經(jīng)分子機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.孕前應(yīng)激誘導(dǎo)產(chǎn)生的PPD模型小鼠表現(xiàn)出一系列抑郁樣表型。產(chǎn)后3周，與空白對(duì)照組比較，模型組母鼠的糖水消耗顯著降低;在強(qiáng)迫游泳測(cè)試及懸尾測(cè)試中，模型組母鼠不動(dòng)時(shí)間顯著增加;模型組母鼠攝食潛伏時(shí)間明顯增加而單位時(shí)間攝食量顯著減少;空白對(duì)照組與普通應(yīng)激組、普通分娩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型組母鼠的仔鼠分娩數(shù)目顯著減少，分娩后3周離乳后仔鼠的存活率也顯著下

8、降。此外，行為學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PPD模型小鼠到產(chǎn)后12周仍然表現(xiàn)出一系列抑郁樣行為。
　　2.產(chǎn)后3周，產(chǎn)后抑郁模型組母鼠海馬DISC1的蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)較空白對(duì)照組相比均顯著升高;與空白對(duì)照組相比，NR1的蛋白表達(dá)明顯上調(diào)而磷酸化的Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1及突觸后膜蛋白GIuR1的蛋白表達(dá)均顯著下調(diào);此外，與空白對(duì)照組相比，模型組母鼠海馬齒狀回神經(jīng)元細(xì)胞的增殖顯著減少;空白對(duì)照組與普通應(yīng)激組、普通分娩組之間無(wú)

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;模型組母鼠血清的E2及CORT水平與對(duì)照組相比則無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.單次給予越甘24小時(shí)后，與PPD母鼠模型組相比，越甘組的糖水消耗顯著增加，絕望不動(dòng)時(shí)間明顯降低，陌生環(huán)境攝食抑制實(shí)驗(yàn)中的潛伏時(shí)間顯著縮短，單位時(shí)間攝食量明顯增加，均表現(xiàn)出與西藥氯胺酮相似的結(jié)果。給藥5天后，與PPD模型組相比，越甘組對(duì)模型小鼠抑郁樣行為的逆轉(zhuǎn)干預(yù)作用依然存在。
　　4.單次給予越甘24小時(shí)后，與模型組母鼠相比，越甘組母鼠海

10、馬DISC1的蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，NR1的表達(dá)也明顯下調(diào)，而磷酸化的Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1及突觸后膜蛋白GluR1均顯著上調(diào)，與氯胺酮的結(jié)果相一致。
　　結(jié)論:
　　1.慢性孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的Bal b/c母鼠產(chǎn)后呈現(xiàn)出一系列抑郁樣癥狀，表型顯著且持久穩(wěn)定。小鼠表現(xiàn)為快感缺失、絕望不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)、伴有焦慮以及母愛(ài)關(guān)懷行為減少等，并且癥狀可持續(xù)到產(chǎn)后12周，顯著地反映出產(chǎn)褥期抑郁障礙的行為表現(xiàn)。
　　2.產(chǎn)

11、后3周，孕前應(yīng)激誘導(dǎo)的產(chǎn)后抑郁模型小鼠海馬腦區(qū)DISC1-Akt-mTOR通路表達(dá)異常。小鼠海馬DISC1蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)均異常升高，表明其與產(chǎn)后抑郁癥的發(fā)病密切相關(guān)。模型小鼠海馬NR1的蛋白表達(dá)上調(diào)，而Akt、mTOR、p70s6k、4E-BP1及突觸后膜蛋白GluR1的蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，表明孕前應(yīng)激通過(guò)DISC1及NR1介導(dǎo)的活化而抑制了Akt-mTOR的活性，進(jìn)而抑制了下游底物p70s6k及4E-BP1的活性，降低了突觸后膜

12、蛋白GluR1的神經(jīng)可塑性調(diào)節(jié)，減少了新生神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)生以及神經(jīng)元的保護(hù)和存活，促進(jìn)了產(chǎn)后抑郁癥的發(fā)生。
　　3.中藥越甘在PPD小鼠模型上發(fā)揮了快速且持久的抗抑郁作用，與氯胺酮相似。中藥越甘單次給藥24小時(shí)后能夠顯著增加產(chǎn)后抑郁模型母鼠的蔗糖消耗量，降低其在強(qiáng)迫游泳及懸尾測(cè)試中的不動(dòng)時(shí)間，在陌生環(huán)境攝食抑制實(shí)驗(yàn)中減少潛伏時(shí)間并增加單位時(shí)間的攝食量，并且上述作用可以至少維持5天。
　　4.調(diào)控海馬DISC1-Akt-mTOR