產(chǎn)后抑郁子代行為的分子機(jī)制及越鞠甘麥大棗湯快速干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、產(chǎn)后抑郁(PPD，postpartum depression)是發(fā)生于產(chǎn)褥期的一種常見精神疾患。由于母子之間的特殊聯(lián)系，患有PPD的母親對(duì)其子女的生理及心理發(fā)展會(huì)產(chǎn)生不良影響。PPD母親的子女更易行為異常，有更多自殺觀念，并且抑郁癥首發(fā)年齡更早。母親患產(chǎn)后抑郁，可作為嬰兒出生后，早期遭遇到的不良應(yīng)激，可能會(huì)導(dǎo)致嬰兒患抑郁癥的易感性大幅提高。由于母代產(chǎn)后抑郁癥而增加了子代罹患抑郁癥的危險(xiǎn)性，給家庭和社會(huì)帶來沉重負(fù)擔(dān)，因而，如何防治母代抑郁

2、影響子代抑郁發(fā)病已成為當(dāng)今社會(huì)亟待研究的熱點(diǎn)問題。依據(jù)本病的臨床發(fā)病特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)研究認(rèn)為子代抑郁癥屬于中醫(yī)的“郁病”范疇之內(nèi)，病機(jī)為“虛瘀（郁）并見”，治法上宜理氣解郁，益氣養(yǎng)陰。越鞠丸是中醫(yī)理氣解郁的經(jīng)典方藥，而甘麥大棗湯是益氣養(yǎng)陰的名方。本實(shí)驗(yàn)研究越鞠甘麥大棗湯合用來治療子代抑郁癥的療效，并且對(duì)其中的作用機(jī)制進(jìn)行分析和探討。
　　目的:觀察產(chǎn)后抑郁對(duì)于子代小鼠抑郁樣行為的影響，探討其影響機(jī)制，并觀察越鞠甘麥大棗湯的快速干預(yù)作用

3、，為越鞠甘麥大棗湯治療子代抑郁癥提供理論和實(shí)驗(yàn)支持，從而進(jìn)一步探索中醫(yī)藥在防治子代抑郁癥方面的手段和方法。
　　方法:Balb/c雌鼠給予慢性應(yīng)激3周:束縛（6小時(shí)/天）聯(lián)合24小時(shí)光照刺激（2次/周）后造成抑郁模型，后令其休息3周，待抑郁樣表型消退后再與Balb/c雄鼠交配繁育F1代。產(chǎn)后3周再次測(cè)量行為學(xué)驗(yàn)證母代抑郁樣表型，從而建立起產(chǎn)后抑郁子代(F1)模型。成年F1代雄鼠與正常雌鼠交配，繁育出F2代。實(shí)驗(yàn)包括六個(gè)部分:

4、>　　1.產(chǎn)后抑郁對(duì)F1代小鼠青少年期及成年期抑郁樣行為的影響。通過測(cè)量F1代小鼠體重、糖水偏好、強(qiáng)迫游泳及新奇環(huán)境攝食實(shí)驗(yàn)等抑郁樣行為的差異，探討產(chǎn)后抑郁對(duì)F1代小鼠青少年期及成年期的影響。
　　2.產(chǎn)后抑郁對(duì)F1代小鼠青少年期及成年期AKT-mTOR信號(hào)通路的影響。運(yùn)用western blot方法測(cè)量F1代小鼠海馬中AKT、mTOR、p70S6K、4EBP-1、DISC1磷酸化及總體水平的表達(dá)，觀察產(chǎn)后抑郁對(duì)于子代小鼠青少年期

5、及成年期AKT-mTOR通路的影響。
　　3.產(chǎn)后抑郁對(duì)F2代小鼠抑郁樣行為及AKT-mTOR信號(hào)通路的影響。通過行為測(cè)試和western blot方法觀察產(chǎn)后抑郁第二代小鼠的抑郁樣行為和海馬中AKT、mTOR、p70S6K磷酸化及總體水平的表達(dá)分子表達(dá)的變化。
　　4.對(duì)產(chǎn)后抑郁F1代小鼠海馬甲基化致病基因的篩選研究。對(duì)富集的CpG位點(diǎn)運(yùn)用RRBS測(cè)序法進(jìn)行測(cè)序，研究子代抑郁癥密切相關(guān)的基因甲基化水平的改變，并且用KEGG

6、 pathway分析和GO分析探究與子代抑郁發(fā)病相關(guān)的基因功能網(wǎng)絡(luò)。
　　5.越鞠甘麥大棗湯對(duì)產(chǎn)后抑郁F1代抑郁樣行為的快速干預(yù)作用。將子代小鼠分為:產(chǎn)后抑郁子代給予生理鹽水組(Veh)，產(chǎn)后抑郁子代給予越鞠甘麥大棗湯組(YG)以及產(chǎn)后抑郁子代給予氯胺酮組(Ket)。Veh組給予生理鹽水，YG組給予越鞠甘麥大棗湯，Ket組給予氯胺酮。再觀察行為學(xué)以確認(rèn)越鞠甘麥大棗湯子子代抑郁的干預(yù)作用。
　　6.越鞠甘麥大棗湯對(duì)產(chǎn)后抑郁F1

7、代小鼠成年期AKT-mTOR信號(hào)通路的干預(yù)作用。運(yùn)用western blot方法測(cè)量子代小鼠海馬中AKT、mTOR、p70S6K、DISC1磷酸化及總體水平的表達(dá)，觀察產(chǎn)后抑郁對(duì)于子代小鼠mTOR通路的影響。
　　結(jié)果:
　　1.產(chǎn)后抑郁F1代小鼠在出生后第3周及第4周體重顯著低于正常對(duì)照組（第3周:p＜0.001;第4周:p＜0.01），糖水偏好較正常對(duì)照組顯著下降(p＜0.001)，強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間顯著增加(p＜0.01

8、)，新奇環(huán)境攝食實(shí)驗(yàn)中攝食潛伏期顯著延長(zhǎng)(p＜0.001)，攝食量顯著減少(p＜0.01)。產(chǎn)后抑郁F1代小鼠在成年期糖水偏好上顯著低于正常對(duì)照組(p＜0.001);單位體重?cái)z食量顯著降低(p＜0.001);懸尾不動(dòng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)(p＜0.001);強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間顯著延長(zhǎng)(p＜0.001)。
　　2.青少年期產(chǎn)后抑郁F1代小鼠海馬中m-TOR分子的磷酸化顯著下降(p＜0.05)，總mTOR分子表達(dá)并未改變，磷酸化的mTOR分

9、子(p-mTOR)與總mTOR的比值顯著下調(diào)(p＜0.05); AKT分子的磷酸化水平顯著低于正常對(duì)照組(p＜0.01)，而總AKT表達(dá)水平無顯著差異(p＞0.05)，并且磷酸化的AKT(p-AKT)與總AKT表達(dá)水平的比值也無顯著變化(p＞0.05); S6K的磷酸化水平(p-p70S6K)顯著下降(p＜0.05)，而4EBP-1的磷酸化水平并無顯著變化(p＞0.05); DISC1顯著上調(diào)(p＜0.05)。成年期產(chǎn)后抑郁F1代小鼠海

10、馬中AKT分子的磷酸化水平仍顯著降低，p-AKT與總AKT表達(dá)水平的比值也顯著降低。m-TOR分子的磷酸化顯著下降，p-mTOR與總mTOR的比值顯著下調(diào)。S6K的磷酸化水平也顯著下降，而DISC1無顯著變化。
　　3.產(chǎn)后抑郁F2代小鼠在新奇環(huán)境攝食實(shí)驗(yàn)上表現(xiàn)出潛伏期延長(zhǎng)的趨勢(shì)，攝食量的顯著下降(p＜0.05)，糖水消耗量也顯著下降(p＜0.05)。在分子水平上，產(chǎn)后抑郁F2代小鼠海馬中AKT的磷酸化水平顯著降低(p＜0.01)

11、，m-TOR的磷酸化顯著下降(p＜0.05)，總mTOR表達(dá)顯著下降(p＜0.05)，并且S6K的磷酸化水平(p-p70S6K)也顯著下降(p＜0.01)。
　　4.抑郁癥密切相關(guān)的基因的甲基化水平發(fā)生異常變化，如Adcyap1、Mapk家族相關(guān)基因，Pik3c、Grin1(NMDAR1)、Grin2d(NMDAR2d)、Grm1(GluR1)以及鈣調(diào)蛋白家族基因（Camk2b、Camk2g、Camk2n1）等。同時(shí)發(fā)現(xiàn)了與抑郁癥

12、密切相關(guān)的通路上的甲基化異常區(qū)域有顯著差異，如MAPK信號(hào)通路，mTOR信號(hào)通路以及Wnt信號(hào)通路等。MAPK信號(hào)通路中DMRs基因數(shù)目有267，mTOR信號(hào)通路中有53個(gè)，Wnt信號(hào)通路中有152個(gè)。
　　5.越鞠甘麥大棗湯可使產(chǎn)后抑郁F1代小鼠糖水偏好顯著上升(p＜0.001);增加攝食量(p＜0.001);縮短懸尾和游泳測(cè)試的不動(dòng)時(shí)間(p＜0.001)。
　　6.越鞠甘麥大棗湯快速上調(diào)產(chǎn)后抑郁F1代小鼠海馬p-AKT、

13、p-mTOR和p70S6K表達(dá)(p＜0.05)，但DISC1的表達(dá)未受到越鞠甘麥大棗湯影響。
　　結(jié)論:
　　1.產(chǎn)后抑郁F1代早在青少年期已表現(xiàn)出抑郁樣行為，并且這一行為可持續(xù)到成年期。
　　2.產(chǎn)后抑郁F1代小鼠在青少年期及成年期AKT-mTOR信號(hào)通路上相關(guān)分子均顯著下調(diào)，提示其可能是產(chǎn)后抑郁F1代抑郁樣行為的部分內(nèi)在機(jī)制。
　　3.產(chǎn)后抑郁母代對(duì)于子代的不良影響可持續(xù)到F2代。F2代在成年期表現(xiàn)出顯著的抑

14、郁樣行為，并且伴隨著海馬AKT-mTOR通路的顯著下調(diào)。
　　4.產(chǎn)后抑郁F1代小鼠海馬中與抑郁癥密切相關(guān)的一些基因和信號(hào)通路發(fā)生了異常甲基化情況，這些甲基化水平的升高或降低可能會(huì)導(dǎo)致基因表達(dá)異常，可能成為子代小鼠抑郁樣表型的部分內(nèi)在機(jī)制。
　　5.越鞠甘麥大棗湯可快速緩解產(chǎn)后抑郁F1代的抑郁樣行為。
　　6.越鞠甘麥大棗湯可快速可上調(diào)產(chǎn)后抑郁F1代海馬中AKT-mTOR通路分子的表達(dá)，可能進(jìn)一步促進(jìn)突觸可塑性的改變，