2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、硫酸軟骨素裂解酶(chondroitinase或chondroitinsulfatelyase,ChSase)具有多種藥用價(jià)值,尤其在制備低分子量硫酸軟骨素方面有著廣闊的應(yīng)用前景。本論文對(duì)ChSase產(chǎn)生菌的篩選、菌株的鑒定及其產(chǎn)酶特性、酶學(xué)性質(zhì)與酶的固定化方法做了系統(tǒng)的研究。 利用快速平板篩選法從鯉魚魚腸標(biāo)本中篩選出一株產(chǎn)ChSase活性較高的菌株N235,通過形態(tài)學(xué)觀察和生理生化試驗(yàn),以及對(duì)該菌株16srRNA基因序列的分析

2、,將菌株N235歸屬為溫和氣單胞菌;對(duì)ChSase的表達(dá)方式和菌株產(chǎn)酶特性的研究表明,ChSase為胞外酶,菌株N235在30℃發(fā)酵36h時(shí)產(chǎn)ChSase活性達(dá)到最高;采用硫酸銨沉淀法制備了粗酶液,并考察了ChSase的酶學(xué)性質(zhì)。 利用制備的粗酶液為原料,分別使用明膠和海藻酸鈉、大孔樹脂、磁性PF微球?yàn)檩d體,進(jìn)行ChSase固定化方法的研究。結(jié)果表明:(1)明膠和海藻酸鈉協(xié)同包埋固定化ChSase的優(yōu)化條件是:明膠濃度10%,海

3、藻酸鈉濃度2%,氯化鈣濃度4%,加酶量1U/ml體系,交聯(lián)劑戊二醛濃度0.05%-0.07%,交聯(lián)時(shí)間10min;利用此條件獲得的固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)為:最適溫度45℃,最適pH7.5,表觀米氏常數(shù)7.06×10-2g/L,具有一定的操作穩(wěn)定性。(2)大孔樹脂吸附固定化ChSase的優(yōu)化條件是:吸附溫度15℃,吸附時(shí)間6h,吸附pH7.0,加酶量150U/g樹脂,交聯(lián)劑戊二醛濃度0.01%,交聯(lián)時(shí)間3h,交聯(lián)溫度4℃;利用此條件獲得的固定

4、化酶的酶學(xué)性質(zhì)為:最適溫度40℃-50℃,最適pH7.0,表觀米氏常數(shù)1.46×10-1g/L,具有較好的操作穩(wěn)定性。(3)磁性PF微球固定化ChSase的優(yōu)化條件是:對(duì)苯二酚8.2g,甲醛15ml,鹽酸2ml制備PF凝膠;PF凝膠1.5g制備磁性PF微球;固定溫度20℃、固定時(shí)間8h、加酶量67.3U/g磁性PF微球制備固定化酶;利用此條件制備的固定化酶的酶學(xué)性質(zhì)為:最適溫度50℃,最適pH8.0,表觀米氏常數(shù)5.23×10-1g/L

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