產(chǎn)硫酸軟骨素酶菌株的篩選、發(fā)酵條件優(yōu)化及酶解產(chǎn)物分析.pdf

1、硫酸軟骨素酶（chondroitinase,ChSase),是一類主要存在于微生物體內(nèi)，能將多種酸性粘多糖如硫酸皮膚素、硫酸軟骨素、透明質酸等降解為寡糖及不飽和二糖的裂解酶。該酶在研究機體內(nèi)硫酸軟骨素糖胺多糖的功能、結構與分布方面、在治療動脈粥樣硬化、關節(jié)炎等方面有著廣泛的應用前景，同時，也用于制備低分子量硫酸軟骨素。低分子量硫酸軟骨素對防治風濕性炎癥和動脈粥樣硬化方面相對于大分子量硫酸軟骨素有更好的療效。利用酶解法制備低分子量硫酸軟骨

2、素相對于目前廣泛采用的物理降解法、化學降解法不需要較高的實驗設備，也不會污染環(huán)境。因此，獲得大量的酶活力高的ChSase具有重要的理論和現(xiàn)實意義,也是本實驗的目的。因而本論文對產(chǎn)ChSase菌株的篩選、菌株產(chǎn)酶條件、菌株的鑒定、酶解產(chǎn)物等做了系統(tǒng)的研究。
　　在本實驗中，利用平板快速篩選和復篩從土壤中篩選出一株高產(chǎn)ChSase菌株，編號為12，通過對其形態(tài)和16SrRNA基因序列的比對，將該菌株鑒定為節(jié)桿菌屬菌株（Arthroba

3、cter sp.），產(chǎn)酶方式為分泌型表達。
　　為了提高12號菌株的產(chǎn)酶水平，采用單次單因素實驗方法對其碳源、氮源、無機鹽及各發(fā)酵條件進行了研究，采用正交實驗方法對碳源濃度、氮源濃度、無機鹽濃度及pH進行了研究。得到的最佳培養(yǎng)基組分為（w/v）：硫酸軟骨素0.8％、KH2PO40.02%、酵母浸粉0.6%、MgSO4·7H200.8%、初始pH6；最適發(fā)酵條件為：按1.5%（v/v）接種量將種子菌液接入50ml/250ml的三角瓶