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文檔簡介
1、【目的】建立硫酸軟骨酶酶ABCI的分泌型真核表達質(zhì)粒，并在膠質(zhì)瘤細胞系中對其表達情況進行觀察。 【方法】通過PCR技術(shù)由宿主菌Proteus vulgaris全基因組DNA中擴增硫酸軟骨素酶ABC I的全長cDNA，在PGEM-T easy載體中對其進行測序和擴增，后將其插入真核表達載體pcDNA3.1/V5/His，并在其5’端基底膜-40信號肽編碼序列，構(gòu)建成真核分泌型蛋白表達載體pcDNA3.1/CABCI/V5/His。
2、用該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)瘤細胞系TJ905，并利用SDS-PAGE考馬斯亮藍染色和免疫印漬檢測培養(yǎng)物上清中的分泌型融合蛋白硫酸軟骨素酶ABC I-V5的表達情況。 【結(jié)果】瓊脂糖凝膠電泳和酶切檢測顯示，經(jīng)PCR擴增所得硫酸軟骨素酶ABC I cDNA大小和酶切圖譜與理論值相符。DNA測序顯示，重組分泌型融合蛋白表達質(zhì)粒pcDNA3.1/CABCI/V5/His的外源性插入片段的大小和序列完全正確。用pcDNA3.1/CABCI/V5/
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