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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
補(bǔ)腎化痰開(kāi)竅法是中醫(yī)學(xué)的重要治法之一,在老年性癡呆的防治過(guò)程中起著重要作用。本文系統(tǒng)回顧和總結(jié)了古代醫(yī)家對(duì)老年性癡呆的認(rèn)識(shí),認(rèn)為此病的基本病機(jī)是痰蒙清竅,腎元虧虛,屬本虛標(biāo)實(shí)之證。從腎虛痰蒙清竅理論探討老年性癡呆的發(fā)病機(jī)理和治療法則,本課題以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作為老年性癡呆動(dòng)物模型,觀察補(bǔ)腎化痰開(kāi)竅法對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶水平、腦組織病理形態(tài)和泛素-蛋白酶體通路相的影響,探討補(bǔ)腎化痰開(kāi)竅法對(duì)該模型的干預(yù)作用和作用機(jī)理,
2、旨在為補(bǔ)腎化痰開(kāi)竅法防治老年病的研究提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:
1.理論探討:整理與中醫(yī)補(bǔ)腎化痰開(kāi)竅法有關(guān)的古今文獻(xiàn),分析補(bǔ)腎化痰開(kāi)竅法的概念、內(nèi)涵,探討補(bǔ)腎化痰開(kāi)竅法的理論基礎(chǔ),及其防治老年性癡呆的理論依據(jù)。
2.以APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠為老年性癡呆動(dòng)物模型,泛素-蛋白酶體途徑為研究靶點(diǎn),研究補(bǔ)腎化痰開(kāi)竅法對(duì)老年性癡呆的作用及其機(jī)制。觀察跳臺(tái)測(cè)試、Morris水迷宮測(cè)試對(duì)小鼠為行為學(xué)影響,檢測(cè)小
3、鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;HE染色、免疫組織化學(xué)染色法觀測(cè)小鼠海馬組織泛素-蛋白酶體途徑病理學(xué)變化,用Western Blot法檢測(cè)小鼠海馬組織泛素-蛋白酶體途徑主要蛋白的含量;以RealTime-PCR檢測(cè)小鼠海馬組織泛素mRNA的表達(dá)。
結(jié)果:
1. Morris水迷宮測(cè)試結(jié)果:
空白組比較,模型組小鼠發(fā)現(xiàn)平臺(tái)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01),游泳總路程明顯增加(P<0.01);與模型組比較,各組小鼠發(fā)現(xiàn)平臺(tái)時(shí)間均
4、縮短(P<0.05),游泳總路程均減少(P<0.05);各給藥組與多奈哌齊組比較各組小鼠發(fā)現(xiàn)平臺(tái)時(shí)間未見(jiàn)明顯差異(P>0.05),游泳總路程未見(jiàn)明顯差異(P>0.05)。益智溫膽組與菖蒲益智丸組比較,兩組小鼠發(fā)現(xiàn)平臺(tái)時(shí)間未見(jiàn)明顯差異(P>0.05),游泳總路程未見(jiàn)明顯差異(P>0.05)。
2.跳臺(tái)測(cè)試實(shí)驗(yàn)結(jié)果
給藥90天后,與空白組比較,模型組小鼠的在跳臺(tái)中錯(cuò)誤次數(shù)明顯增加(P<0.01),潛伏期明顯縮短(P<0.
5、01)。與模型組比較,多奈哌齊組和其它各組小鼠的出錯(cuò)次數(shù)明顯減少(P<0.01),多奈哌齊組、益智溫膽組和菖蒲益智丸組小鼠的潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。與多奈哌齊組比較,益智溫膽組和菖蒲益智丸組小鼠的出錯(cuò)次數(shù)和潛伏期無(wú)明顯差別(P>0.05);補(bǔ)腎組化痰組出錯(cuò)次數(shù)和潛伏期有所差別(P<0.05),化痰組潛伏期有所差別(P<0.05)。
3. HE染色
模型組主要表現(xiàn)為較明顯的腦神經(jīng)元變性、可見(jiàn)到神經(jīng)纖維纏結(jié)和淀粉
6、樣蛋白沉積斑塊。多奈哌齊組和補(bǔ)腎組對(duì)模型轉(zhuǎn)基因小鼠海馬病理形態(tài)影響不明顯,多奈哌齊組僅僅可以觀察到神經(jīng)元數(shù)量變化,以及細(xì)胞結(jié)構(gòu)排列較為整齊,補(bǔ)腎組神經(jīng)元形態(tài)排列較為整齊,結(jié)構(gòu)較多奈哌齊組完整。益智溫膽組、菖蒲益智丸組、化痰組對(duì)神經(jīng)元的保護(hù),空泡變性以及細(xì)胞核增大也有一定好轉(zhuǎn),神經(jīng)細(xì)胞排列以及細(xì)胞形態(tài)明顯較好,神經(jīng)纖維纏結(jié)不明顯。
4.免疫組化
泛素陽(yáng)性免疫產(chǎn)物定位于海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞漿內(nèi)。免疫組化結(jié)果顯示模型組、多奈哌
7、齊組切片內(nèi)海馬 CA1區(qū)可見(jiàn)大量泛素,補(bǔ)腎組海馬 CA1區(qū)也可見(jiàn)到有部分泛素的聚集;益智溫膽組與菖蒲益智丸組相差不多,二者最少??瞻捉M小鼠海馬CA1區(qū)灰度值明顯較低(P<0.01);而多奈哌齊組與其相差無(wú)幾無(wú)明顯差異(P>0.05);益智溫膽組、補(bǔ)腎組、化痰組與菖蒲益智丸組小鼠海馬CA1區(qū)灰度值與其有明顯差異(P<0.01)。
5.小鼠海馬組織Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果
APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠海馬組織泛素抗
8、體蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)結(jié)果表示:與空白組比較,模型組小鼠海馬組織泛素相對(duì)表達(dá)量有顯著性差別(P<0.01)。與模型組比較,多奈哌齊組海馬組織泛素相對(duì)表達(dá)量未見(jiàn)顯著性差異(P>0.05);模型組較其它各組均顯示表達(dá)量增加。
6.小鼠海馬組織Real Time-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果
與空白組比較,模型組泛素mRNA表達(dá)明顯上調(diào),益智溫膽組、補(bǔ)腎組、化痰組、菖蒲益智丸組泛素mRNA均有不同程度的上調(diào)。與模型組比較,多奈哌齊組、益智溫膽
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