固本培元、養(yǎng)心安神法對(duì)慢性睡眠剝奪大鼠模型作用機(jī)制的理論和實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：以《內(nèi)經(jīng)》失眠理論為基礎(chǔ)，梳理歷代醫(yī)家睡眠理論及實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)認(rèn)識(shí)，提出臟腑本元虧虛、心神失養(yǎng)是慢性失眠發(fā)病基礎(chǔ)，固本培元，養(yǎng)心安神是失眠治療基本原則，并且在系統(tǒng)梳理歷代醫(yī)家用藥經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，結(jié)合導(dǎo)師臨床實(shí)踐基礎(chǔ)創(chuàng)立了固本安神方。通過(guò)觀察固本安神方水煎劑、酒劑對(duì)閾上劑量戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時(shí)間和閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠入睡率的影響、慢性睡眠剝奪大鼠模型呼吸頻率、心率及力竭游泳實(shí)驗(yàn)等指標(biāo)變化，分析固本安神方促眠實(shí)驗(yàn)、大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和神經(jīng)

2、遞質(zhì)及其受體表達(dá)等指標(biāo)監(jiān)測(cè)分析，較系統(tǒng)地對(duì)固本安神方的作用機(jī)制進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　方法：先取健康昆明種小鼠84只,以12只每組的數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、艾司唑侖組、固本安神方小劑量組、固本安神方大劑量組、金眠酒低劑量組、金眠酒中劑量組和金眠酒高劑量組。除空白對(duì)照組以外各組按人與小鼠之間等效劑量換算分別為0.13mg.kg-1.d-1、15g.kg-1.d-1、30g.kg-1.d-1、0.30g/kg-1.d-1、0.60g/k

3、g-1.d-1、1.20g/kg-1.d-1，給藥容積則為0.2ml.10g-1，觀察固本安神方的促眠作用。然后將健康Wistar大鼠隨機(jī)分成5組，每組8只：空白對(duì)照組；模型組；固本安神方小劑量組；固本安神方大劑量組，艾司唑侖組。固本安神方大、小劑量組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在睡眠剝奪造模滿4w后開始灌服給藥7天，給藥容積為2ml.100g-1。艾司唑侖組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，將艾司唑侖研磨成粉狀用純凈水混合，按0.05 mg〃kg-1〃d-1用藥標(biāo)準(zhǔn)灌胃。所有

4、動(dòng)物給藥時(shí)間均為每晚18：00。持續(xù)一周治療結(jié)束后取材所有動(dòng)物。具體指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果如下：
　　1對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物睡眠情況、活動(dòng)量、雙目及口唇、爪甲皮毛等一般情況和呼吸頻率、體重、攝食量、力竭游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果等情況進(jìn)行前后對(duì)比監(jiān)測(cè)分析；
　　2利用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察分析大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化；
　　3采用液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)大鼠下丘腦部位谷氨酸（Glu）及γ-氨基丁酸（GABA）含量、熒光定量PCR檢測(cè)大鼠下丘腦γ-氨基丁

5、酸受體GABAA-RmRNA的影響
　　4采用高效液相色譜法檢測(cè)下丘腦5-羥色胺、ELISA法檢測(cè)5-羥吲哚乙酸的影響
　　結(jié)果：
　　1與空白對(duì)照組比較，艾司唑侖組、固本安神方大、小劑量組及金眠酒高中低劑量組均能顯著延長(zhǎng)閾上劑量標(biāo)準(zhǔn)戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間，效果明顯（P<0.01），增加閾下劑量戊巴比妥鈉致小鼠入睡率效果顯著（P<0.01），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，固本安神方大劑量組對(duì)小鼠的催眠作用比低劑量組更明顯，但無(wú)統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)意義（P>0.05），酒劑作用比水煎劑效果明顯，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2模型組動(dòng)物時(shí)有呵欠不斷，嗜睡，懶動(dòng)，精神萎靡，雙目、口唇呈蒼白色或淡粉紅色；目光呆滯，皮毛枯槁蓬亂、濕透，呈淡象牙色澤，爪甲粗糙，抓取反抗無(wú)力；固本安神方大、小劑量組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物精神稍萎靡，時(shí)有呵欠，雙目及口唇呈白色，皮毛略有枯槁蓬亂現(xiàn)象，抓取時(shí)反抗較劇。與空白對(duì)照組相比，模型組呼吸頻率、心率加快明顯，收縮壓升高顯著，力竭性游泳時(shí)間縮短顯著，體重

7、減輕顯著，耳溫升高顯著，攝食量減少顯著(P<0．01)；與模型組比較，固本安神方大、小劑量組呼吸頻率降低顯著，心率減慢顯著，力竭性游泳時(shí)間顯著延長(zhǎng)，耳溫顯著降低，攝食量顯著增加(P<0．01)，收縮壓降低，體重增加(P<0．05)；與模型組比較，艾司唑侖組呼吸頻率降低顯著，力竭性游泳時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0．01)，收縮壓降低，攝食量增加，耳溫降低(P<0．05)，但心率減慢和體重增加指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。固本安神方總體效果優(yōu)于

8、艾司唑侖，且呈量效遞增關(guān)系。
　　3在定位航行與空間搜索實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組相比，模型組潛伏期時(shí)間延長(zhǎng)顯著(P<0．01)，平臺(tái)象限的游泳距離占總距離百分比顯著降低(P<0．01)，跨過(guò)原平臺(tái)位臵次數(shù)顯著下降(P<0．01)，池壁20％區(qū)域、池壁40％區(qū)域游泳距離百分比升高顯著(P<0．01)；與模型組相比，固本安神方大、小劑量組和艾司唑侖組潛伏期時(shí)間縮短顯著(P<0．01)，平臺(tái)象限間游泳距離百分比顯著升高(P<0．01)，跨過(guò)

9、原平臺(tái)位臵次數(shù)顯著增加(P<0．01)，池壁20％區(qū)域、池壁40％區(qū)域游泳距離百分比降低顯著(P<0．01)。中藥固本安神方療效總體優(yōu)于西藥艾司唑侖。
　　4與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠下丘腦部位Glu、GABA兩類神經(jīng)遞質(zhì)含量均明顯增高(P<0．01)，Glu增加相對(duì)更為明顯，Glu、GABA比值比例增大；固本安神方大、小劑量組大鼠下丘腦部位氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)Glu、GABA含量與模型組比較，顯著減少， Glu減少相對(duì)更為明顯，且

10、Glu/GABA比值比例有減小現(xiàn)象，并且呈現(xiàn)出一定量效關(guān)系發(fā)生（P<0．05)；與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠下丘腦組織GABAA-R mRNA表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.01）；與模型組比較，固本安神方高、低劑量組及艾司唑侖組大鼠下丘腦組織GABAA-R mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)。
　　5與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠下丘腦內(nèi)5-HT和5-HIAA含量降低，較明顯(P<0.01)；固本安神方大、小劑量組下丘腦中5-HT含量均增

11、加,與模型組相比有顯著性差異(P<0.01)；艾司唑侖組與模型組相比,下丘腦中5-HIAA含量增加,二者相比有顯著性差異(P<0.05)。固本安神方大劑量組和艾司唑侖組下丘腦中5-HIAA含量均有增加,與模型組相比有顯著性差異(P<0.05);固本安神方小劑量組下丘腦中5-HIAA含量與模型組相比有增加，但無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、在《內(nèi)經(jīng)》理論基礎(chǔ)上，綜合中醫(yī)歷代醫(yī)家相關(guān)睡眠理論，提出臟腑本元虧虛

12、、心神失養(yǎng)是導(dǎo)致失眠發(fā)病的根本原因，根據(jù)中醫(yī)學(xué)的整體觀念提出了“固本培元，養(yǎng)心安神”的治療原則，并且在系統(tǒng)梳理歷代醫(yī)家用藥經(jīng)驗(yàn)及導(dǎo)師臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上創(chuàng)立了固本安神方。
　　2、固本安神方和艾司唑侖相比，臨床療效相當(dāng)，并呈量效遞增關(guān)系，固本安神方對(duì)模型大鼠中醫(yī)癥狀的療效改善強(qiáng)于艾司唑侖，且副作用小。
　　3、從固本安神方高、低劑量組和金眠酒中、高劑量組及艾司唑侖組實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，在增加閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠睡眠只數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

13、方面，各組均有顯著效果，且可延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間，說(shuō)明固本安神方與鎮(zhèn)靜催眠藥艾司唑侖有協(xié)同作用，從而證實(shí)了固本安神方具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠作用,且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。酒劑與中藥配伍雖有協(xié)同增效作用，但在此次試驗(yàn)中金眠酒相較于湯劑效果差異性不明顯（P>0.05），該藥效實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步深入研究固本安神方對(duì)慢性SD大鼠模型的作用機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　4、固本安神方可明顯影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物5-HT以及5-HIAA含量，使其接近正常