睡眠剝奪對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠單胺遞質(zhì)及腺苷的影響.pdf

1、背景:腺苷作為一種神經(jīng)調(diào)質(zhì),可以通過與受體結(jié)合調(diào)節(jié)各種神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。此外,越來越多的人認(rèn)為腺苷是一種睡眠因子,主要通過與其受體結(jié)合在睡眠調(diào)節(jié)中起作用。有研究認(rèn)為腺苷及其受體與抑郁及抗抑郁過程有一定關(guān)系。睡眠剝奪可以發(fā)揮快速抗抑郁效應(yīng),但其中的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制至今未明,目前的研究多集中于單胺類神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng),我們認(rèn)為睡眠剝奪快速抗抑郁的過程可能是多物質(zhì)相互作用、共同參與的過程。即然如此,腺苷是否參與了睡眠剝奪的快速抗抑郁過程呢?在此過程中,

2、腺苷在不同腦區(qū)的含量是否有所變化呢?它與單胺遞質(zhì)的變化情況有何關(guān)系?目前尚無這方面的報(bào)道。本研究擬通過對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠進(jìn)行連續(xù)72小時(shí)快眼動(dòng)睡眠剝奪(rapid eye movement sleep deprivation,REMSD)觀察大鼠不同腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)以及腺苷、肌苷含量的改變,旨在探討腺苷在睡眠剝奪快速抗抑郁起效機(jī)制中可能的作用。
　　目的:觀察睡眠剝奪對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠不同腦區(qū)組織勻漿液中單胺遞質(zhì)及腺苷、

3、肌苷含量的影響。
　　材料和方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為Sprague Dawley2-3月齡雄性大鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組,抑郁模型組,抑郁模型+72小時(shí)快眼動(dòng)睡眠剝奪組(以下稱REMSD組),抑郁模型組+72小時(shí)大平臺(tái)對(duì)照組(以下稱大平臺(tái)對(duì)照組),每組8只。應(yīng)激造模采用慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激(chronic mild unpredicted stress, CMUS)和分養(yǎng)兩種經(jīng)典模型結(jié)合的方式來建立抑郁模型, REMSD組采用小平臺(tái)水環(huán)境

4、法,用大平臺(tái)水環(huán)境做對(duì)照,排除水環(huán)境的影響。采用強(qiáng)迫游泳的方法記錄大鼠在24℃-25℃水溫中連續(xù)5min強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間,觀察大鼠抑郁行為及情緒的變化;采用高效液相色譜儀紫外檢測(cè)器(high-performance liquid chromatography with Photodiode Array Detector,HPLC-PAD)檢測(cè)大鼠海馬、下丘腦、紋狀體腦區(qū)勻漿液中腺苷( adenosine)、肌苷(inosine)含量的

5、變化,采用高效液相色譜儀-熒光檢測(cè)器(high-performance liquid chromatography with fluorescence detection,HPLC-FLD)檢測(cè)大鼠海馬、下丘腦、紋狀體腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用EXCEL2003和SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(X±SE)表示,采用單因素方差分析(ANOVA)和t檢驗(yàn)(T-test)進(jìn)行組間均數(shù)比較,P<0.05為差異

6、顯著。
　　結(jié)果:1.經(jīng)過21天慢性應(yīng)激后,抑郁模型組與REMSD組大鼠5min強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間與應(yīng)激前相比顯著延長(zhǎng);抑郁模型大鼠經(jīng)過72小時(shí)REMSD后5min強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間顯著減少;而大平臺(tái)對(duì)照組大鼠經(jīng)過21天慢性應(yīng)激后5min強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間與應(yīng)激前相比差別卻無顯著性(造模失敗),經(jīng)過72小時(shí)大平臺(tái)水環(huán)境處理后大鼠5min強(qiáng)迫游泳的不動(dòng)時(shí)間與慢性應(yīng)激后相比差別依舊無顯著性。
　　2.正常對(duì)照組海馬去甲腎上腺素(

7、norepinephrine, NE)含量為(0.7854±0.2230)ng/mg,與抑郁模型組海馬NE含量(0.7039±0.2256)ng/mg相比差異不顯著(P﹥0.05),REMSD組海馬NE含量(0.9589±0.2056)ng/mg顯著高于抑郁模型組(P﹤0.05);正常對(duì)照組海馬5-羥色胺(Serotonin,5-HT)含量為(0.2502±0.1253)ng/mg,抑郁模型組海馬5-HT含量(0.1562±0.0696

8、)ng/mg與之相比顯著減少(P﹤0.05), REMSD組海馬5-HT含量(0.3903±0.0996)ng/mg與抑郁模型組相比顯著增高,差別有極顯著性(P﹤0.001);利用HPLC-FLD未能檢測(cè)出海馬多巴胺(dopamine, DA)含量。
　　3.正常對(duì)照組下丘腦NE含量為(4.7066±1.2337)ng/mg,與抑郁模型組下丘腦NE含量(4.3204±0.9312)ng/mg相比差異不顯著(P﹥0.05),REMS

9、D組下丘腦NE含量(4.9031±0.9962)ng/mg與抑郁模型組相比有一定程度的升高,但無顯著性差異;正常對(duì)照組下丘腦5-HT含量為(0.4850±0.0878)ng/mg,抑郁模型組含量(0.3350±0.1923)ng/mg與之相比有一定程度的減少,但無顯著性差異,REMSD組下丘腦5-HT含量為(0.7088±0.2903) ng/mg與抑郁模型組相比顯著增高(P﹤0.01);利用HPLC-FLD僅能檢測(cè)到正常對(duì)照組下丘腦的

10、DA含量(3.8347±2.3783)ng/mg,其它幾組未檢測(cè)出。
　　4.利用HPLC-FLD未能檢測(cè)出各組紋狀體腦區(qū)NE的含量;正常對(duì)照組紋狀體腦區(qū)5-HT含量為(0.4612±0.3313)ng/mg, REMSD組為(0.3474±0.1677)ng/mg,兩者相比差別無顯著性(P﹥0.05),利用HPLC-FLD未能檢測(cè)出抑郁模型組紋狀體腦區(qū)5-HT的含量;正常對(duì)照組紋狀體DA含量為(10.6081±2.8886)ng

11、/mg,抑郁模型組為(10.3086±0.3029)ng/mg,與正常對(duì)照組相比差別無顯著性(P﹥0.05),REMSD組紋狀體DA含量為(15.3682±2.6326) ng/mg,較抑郁模型組顯著增高,差別有極顯著性(P=0.000)。
　　5.正常對(duì)照組海馬腺苷含量為(138.7945±27.1076) ng/mg,抑郁模型組含量(101.3403±28.0018)ng/mg與之相比顯著減少(P﹤0.05), REMSD組海

12、馬腺苷含量為(69.3919±9.7863)ng/mg,與抑郁模型組相比亦顯著減少(P﹤0.05);正常對(duì)照組海馬肌苷含量為(25.5273±6.6599)ng/mg,抑郁模型組含量(17.9310±5.5740)ng/mg與之相比顯著減少(P﹤0.05),REMSD組海馬肌苷含量(10.0350±1.5874)ng/mg與抑郁模型組相比亦顯著減少(P﹤0.05)。
　　6.正常對(duì)照組下丘腦腺苷含量為(96.6095±30.075

13、4) ng/mg,抑郁模型組含量(64.3065±19.4130) ng/mg與之相比顯著減少(P﹤0.05), REMSD組下丘腦腺苷含量(34.6534±6.0269)ng/mg與抑郁模型組相比亦顯著減少(P﹤0.01);正常對(duì)照組下丘腦肌苷含量為(52.6599±13.1163)ng/mg,抑郁模型組含量(37.9938±3.7118)ng/mg與之比較顯著減少(P﹤0.05),REMSD組下丘腦肌苷含量(27.6484±6.74

14、90)ng/mg與抑郁模型組相比亦顯著減少(P﹤0.01)。
　　7.正常對(duì)照組紋狀體腺苷含量為(180.7181±36.0231) ng/mg,抑郁模型組含量(137.0903±25.4030)ng/mg與之相比顯著減少(P﹤0.05),REMSD組下丘腦腺苷含量(143.6780±43.0931)ng/mg與抑郁模型組相比差別不顯著(P﹥0.05);正常對(duì)照組大鼠紋狀體肌苷含量為(27.2072±6.2801)ng/mg,抑郁

15、模型組含量(21.7120±5.1758)ng/mg與之相比有一定程度減少,但無顯著性差異(P=0.077),REMSD組紋狀體肌苷含量(13.8737±2.6891)ng/mg與抑郁模型組相比顯著減少(P﹤0.01)。
　　結(jié)論:1.72小時(shí)REMSD可以明顯改善慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激引起的大鼠抑郁樣行為;
　　2.海馬部位5-HT和NE含量的增高可能在REMSD快速抗抑郁過程中起著重要的作用;
　　3.下丘腦部位5