光照應激對雄性SD大鼠生精功能、睪丸和小腸內(nèi)annexin 5、GnRH及其受體表達的影響.pdf

1、應激(stress)是指機體受到體內(nèi)外各種環(huán)境因素刺激時所作出的特異性和(或)非特異性反應。長期處于應激狀態(tài),機體的自穩(wěn)態(tài)將改變,從而誘發(fā)機體產(chǎn)生疾病。連續(xù)的光照刺激影響晝夜節(jié)律,以至對內(nèi)分泌系統(tǒng)特別是垂體.性腺軸產(chǎn)生重要改變,導致個體體重和性腺發(fā)育出現(xiàn)異常,影響GnRH、LH分泌的強度和持久性,從而對機體各個部分造成一定的影響。
　　 文獻報道,多種形式的應激均能導致血漿糖皮質(zhì)激素水平迅速增加,睪酮水平變化,從而影響生殖功能,

2、有時導致不育。促性腺激素釋放激素(gonadotropinreleasinghormone,GnRH)由下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌細胞合成,以脈沖方式分泌,經(jīng)垂體門脈系統(tǒng)進入垂體前葉,與促性腺激素分泌細胞的GnRH受體(GnRHR)結(jié)合后,刺激黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)分泌,從而調(diào)節(jié)性腺內(nèi)配子形成和激素功能。而Annexin5是一種鈣離子依賴性磷脂酰絲氨酸結(jié)合蛋白,在組織中有廣泛的分布,包括睪丸間質(zhì)細胞和支持細胞。Annexin5具

3、有多種功能,如抗炎、抗凝血、蛋白激酶C(PKC)抑制劑等。Kwaminamietal,發(fā)現(xiàn)GnRH能促進垂體促性腺細胞中annexin5的表達,調(diào)節(jié)FSH和LH的分泌,提示GnRH及其受體、annexin5都可能參與并調(diào)節(jié)精子發(fā)生的過程。因此,本實驗模擬戰(zhàn)爭環(huán)境晝夜節(jié)律紊亂建立了一個持續(xù)光照應激模型。研究光照應激模型對雄性SD大鼠生精功能的影響,并檢測生殖系統(tǒng)的annexin5、GnRH及其受體的定位及蛋白、mRNA表達的變化,為進一步

4、研究應激對生殖的干擾及制定對應激所致的生殖損害的保護策略提供實驗依據(jù);同時也部分了研究光照應激模型對SD大鼠小腸內(nèi)annexin5、GnRH受體的定位及蛋白表達的變化,為進一步研究應激對消化的干擾提供前期實驗探索。
　　 本研究發(fā)現(xiàn)光照應激14d后,大鼠體重、睪丸重量、睪丸指數(shù)、附睪重量、精子計數(shù)、睪酮分泌量和睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)均有明顯變化(P<0.05)。HE染色顯示睪丸內(nèi)生精小管變粗,管腔內(nèi)生精細胞增多;westernblot顯示

5、光照應激14d后,3B-HSD蛋白表達量顯著高于對照組(P<0.05),21d、28d后,3β-HSD蛋白表達量繼續(xù)增加,與對照組相比差異極顯著(P<0.01)。在光照應激不同時間段,annexin5、GnRH及其受體的定位也沒有明顯變化。持續(xù)光照14d、21d后,睪丸內(nèi)GnRHR的蛋白表達水平與相應的對照組相比,差異顯著(P<0.05),持續(xù)光照28d后實驗組GnRHR的蛋白表達水平逐漸降低無顯著差異。實驗組大鼠GnRHR在mRNA表

6、達水平升高,但不同時間段與對照組相比均無顯著差異。光照應激14d、21d后,睪丸內(nèi)annexin5蛋白和對照組相比顯著升高(P<0.01:P<0.05),28d逐漸降低無顯著差異。Annexin5在tuRNA表達水平升高,但不同時間段與對照組相比均無顯著差異。并且GnRH受體、annexin5蛋白表達在小腸內(nèi)和在睪丸中的蛋白表達呈現(xiàn)出相似的趨勢。
　　 結(jié)論:(1)光照應激狀態(tài)下,雄性SD大鼠睪丸的生精功能受到了一定的影響,表現(xiàn)

7、為:睪丸內(nèi)3B-HSD的蛋白表達量增加,睪丸分泌功能上升,附睪尾精子相對計數(shù)增加,生精小管中生精細胞增加,睪酮分泌量增加。(2)光照應激能誘導睪丸內(nèi)annexin5、CmRH受體在蛋白質(zhì)和mRNA水平在不同時間點發(fā)生量的變化,并呈現(xiàn)出升高的趨勢。(3)光照應激能誘導小腸內(nèi)GnRH受體、annexin5在蛋白質(zhì)平在不同時間點發(fā)生量的變化,并呈現(xiàn)出升高的趨勢。我們以上的研究結(jié)果提示:CmRH及其受體可能作為應激因子通過調(diào)節(jié)annexin5的