Annexin 5對大鼠睪丸Leydig細胞睪酮合成的影響及調(diào)控機制的研究.pdf

1、膜聯(lián)蛋白5(annexin5)是annexins家族中分布最廣泛、含量最豐富的成員之一,參與很多重要的生理功能,如抗凝血、具有鈣離子通道活性、抑制磷脂酶A2及蛋白激酶C的活性等等。
　　 先前的研究表明,annexin5在大鼠睪丸間質(zhì)細胞(Leydig cell)和支持細胞(Sertolicell)中均有分布。3β-羥類固醇脫氫酶(3β-HSD)是類固醇激素合成中睪丸所獨有的酶,它是鑒定睪丸間質(zhì)細胞的重要性指標(biāo)。本實驗室先前的研

2、究已經(jīng)證實,促性腺激素釋放激素激動劑(GnRHa)能上調(diào)大鼠睪丸間質(zhì)細胞中annexin5和3β-HSD在mRNA水平和蛋白水平的表達;GnRH刺激體外培養(yǎng)的成年大鼠睪丸間質(zhì)細胞3 h后,睪酮水平也有明顯提高。提示annexin5可能是一種重要的生殖內(nèi)分泌調(diào)控因子,與睪酮之間存在著某種內(nèi)在聯(lián)系。
　　 我們重組了具有蛋白活性的大鼠annexin5,來研究外源性的annexin5對睪酮分泌的影響及調(diào)控機制。用不同濃度的annexi

3、n5處理原代大鼠睪丸間質(zhì)細胞,結(jié)果顯示,annexin5終濃度為0.1 nmol/L、1 nmol/L時,實驗組睪酮含量顯著高于對照組(未加annexin5處理),而終濃度為10 nmol/L時,實驗組睪酮的含量雖也有升高,但無統(tǒng)計學(xué)意義;用1 nmol/L annexin5處理細胞不同時間,發(fā)現(xiàn)6 h和12 h后睪酮分泌量與對照組相比無顯著性差異;處理24 h后,睪酮的分泌顯著高于對照組,而隨著處理時間的延長,作用36 h后,睪酮分泌

4、量又顯著下降。接著我們進一步用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白免疫印跡(western blotting)方法在mRNNA水平和蛋白水平檢測annexin5對類固醇急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)和睪酮合成相關(guān)酶表達的影響,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,在mRNA水平上,annexin5處理細胞12 h后,只有17β-羥基類固醇脫氫酶X型(17β-HSD10)的表達顯著升高,其它均無統(tǒng)計學(xué)意義;而處理24h后,StAR、膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450

5、scc)、3β-HSD和17β-HSD10的表達均有顯著升高,而17α-羥化酶(17α-hydroxylase,Cyp17A)表達則無顯著差異;在蛋白水平上,annexin5處理細胞12 h后,17β-HSD的表達仍有顯著升高,處理24 h后發(fā)現(xiàn),除StAR表達無顯著變化外,P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表達均有升高。然后我們用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞2 h后,再用1 nmol/L,annexin5處理不同時間,

6、結(jié)果顯示:annexin5刺激間質(zhì)細胞5 min后P-ERK水平開始升高,在10 min時達到峰值,60-min恢復(fù)至正常水平。用ERK抑制劑PD98059(50μmol/L)預(yù)處理間質(zhì)細胞20 min后再加入annexin5,發(fā)現(xiàn)PD98059完全逆轉(zhuǎn)了annexin5促進睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的作用以及對P450scc、3β-HSD和17β-HSD三種蛋白表達的促進作用。
　　 由此我們得出結(jié)論:大鼠的annexin5蛋白能劑