疼痛應(yīng)激對(duì)雄性SD大鼠生精功能及睪丸內(nèi)annexin5表達(dá)的影響.pdf

1、應(yīng)激(stress)是指機(jī)體受到體內(nèi)外各種環(huán)境因素刺激時(shí)所作出的特異性和(或)非特異性反應(yīng)。作戰(zhàn)應(yīng)激反應(yīng)(combat stress reaction,CRS)是指遭受戰(zhàn)爭(zhēng)環(huán)境刺激的軍人常常喪失應(yīng)付正常生活能力,并伴有精神障礙；作戰(zhàn)應(yīng)激反應(yīng)若得不到干預(yù)會(huì)導(dǎo)致創(chuàng)傷后應(yīng)激性障礙(post-traumatic stress disorder,PTSD)。從美軍一戰(zhàn)、二戰(zhàn)、越戰(zhàn)到海灣戰(zhàn)爭(zhēng)看出,作戰(zhàn)應(yīng)激可能導(dǎo)致許多的應(yīng)激性疾病,包括泌尿生殖系統(tǒng)疾

2、病,是部隊(duì)非戰(zhàn)斗減員的主要因?yàn)橹?。疼痛是由傷害性刺激引起的一種應(yīng)激反應(yīng),也是戰(zhàn)爭(zhēng)創(chuàng)傷引起的常見(jiàn)癥狀.急慢性疼痛,特別是慢性疼痛不僅對(duì)士兵的身體,而且對(duì)他們的心理也產(chǎn)生很大的影響,嚴(yán)重影響軍隊(duì)的戰(zhàn)斗力。
　　 文獻(xiàn)報(bào)道,多種形式的應(yīng)激均能導(dǎo)致血漿糖皮質(zhì)激素水平迅速增加,睪酮水平降低,抑制生殖功能,甚至導(dǎo)致不育。Annexin5是一種鈣離子依賴(lài)性磷脂酰絲氨酸結(jié)合蛋白,在組織中有廣泛的分布,包括睪丸間質(zhì)細(xì)胞和支持細(xì)胞。Annexin

3、5具有多種功能,如抗炎、抗凝血、蛋白激酶C(PKC)抑制劑等。Kwaminami et al發(fā)現(xiàn)GnRH能促進(jìn)垂體促性腺細(xì)胞中annexin5的表達(dá),調(diào)節(jié)FSH和LH的分泌,提示annexin5可能參與并調(diào)節(jié)精子發(fā)生的過(guò)程。因此,本研究通過(guò)建立急慢性?xún)煞N不同動(dòng)物模型模擬戰(zhàn)爭(zhēng)創(chuàng)傷引起的疼痛,即:福爾馬林(formalin)致炎的急性疼痛模型和坐骨神經(jīng)選擇性損傷(spared nerve injury,SNI)引起的慢性疼痛模型,觀察應(yīng)激對(duì)

4、雄性SD大鼠生精功能及睪丸內(nèi)annexin5定位及表達(dá)的變化,為進(jìn)一步研究應(yīng)激對(duì)生殖的干擾及制定對(duì)應(yīng)激所致的生殖損害的保護(hù)策略提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 本研究以福爾馬林注射后1h,6h,24h,72h作為福爾馬林致炎急性疼痛應(yīng)激模型,發(fā)現(xiàn)不同時(shí)間段應(yīng)激后,大鼠體重、睪丸重量、睪丸指數(shù)、附睪重量、精子計(jì)數(shù)和睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)均無(wú)顯著變化(P>0.05)。但是,附睪指數(shù)在福爾馬林注射后1h,6h,24h顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。免疫組化

5、染色顯示,在福爾馬林注射后1h,3β-HSD表達(dá)顯著低于對(duì)照組(P<0.05),6h,24h3β-HSD表達(dá)逐漸增加,到72h時(shí)恢復(fù)到對(duì)照水平。急性疼痛應(yīng)激不同時(shí)間段,annexin5的定位沒(méi)有明顯變化。福爾馬林注射后1h annexin5蛋白和對(duì)照組相比顯著降低(P<0.05),6h、24h逐漸升高,72h顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。Annexin5在mRNA水平變化和蛋白水平變化一致,但不同時(shí)間段與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異。

6、>　　 以坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷誘導(dǎo)疼痛14d,21d,28d作為慢性疼痛應(yīng)激,結(jié)果發(fā)現(xiàn):14d和21d手術(shù)組大鼠體重均低于對(duì)照組,但和同期對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P>0.05)。不同時(shí)間段各組大鼠睪丸和附睪系數(shù)均無(wú)明顯變化。28d后手術(shù)組附睪尾精子相對(duì)計(jì)數(shù)顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。HE染色顯示,坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷誘導(dǎo)疼痛應(yīng)激28d后睪丸生精上皮中生精細(xì)胞減少,生精小管腔內(nèi)精子數(shù)量減少。Western blot結(jié)果顯示28d手

7、術(shù)組3β-HSD表達(dá)顯著低于對(duì)正常照組和假手術(shù)組(P<0.05)。慢性疼痛應(yīng)激14d和21d后,手術(shù)組大鼠睪丸almexin5在支持細(xì)胞定位減少。在蛋白質(zhì)水平,Annexin5在應(yīng)激后14d和21d表達(dá)顯著降低(P<0.05),到28d恢復(fù)到對(duì)照組水平。在mRNA水平,坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷后14 d armexin5 mRNA顯著低于同期對(duì)照組,隨后逐漸增加,到28 d恢復(fù)到正常生理水平。
　　 結(jié)論:(1)急慢性疼痛應(yīng)激狀態(tài)

8、下,雄性SD大鼠睪丸的生精功能受到了不同程度的影響,表現(xiàn)為:急性疼痛應(yīng)激狀態(tài)下,睪丸內(nèi)3β-HSD的表達(dá)減少,睪丸分泌功能降低；慢性疼痛應(yīng)激狀態(tài)下,附睪尾精子相對(duì)計(jì)數(shù)減少,生精小管中生精細(xì)胞減少,睪丸內(nèi)3β-HSD表達(dá)減少。(2)疼痛應(yīng)激能誘導(dǎo)睪丸內(nèi)annexin5在蛋白質(zhì)和mRNA水平在不同時(shí)間點(diǎn)可能發(fā)生量的變化。急性疼痛應(yīng)激狀態(tài)下annexin5蛋白含量隨時(shí)間先顯著降低而后顯著增加。慢性疼痛應(yīng)激狀態(tài)下annexin5蛋白質(zhì)含量和mR