香茶藨子葉片中總酚酸、總黃酮提取及生物活性研究.pdf

1、在本實(shí)驗(yàn)中采用低共熔溶劑作為提取溶劑，利用負(fù)壓空化提取技術(shù)對(duì)不同時(shí)期香茶藨子葉片中總酚酸、總黃酮進(jìn)行綠色高效提取，通過(guò)HPLC對(duì)香茶藨子葉片中沒(méi)食子酸、綠原酸、蘆丁、阿魏酸、異槲皮苷5種常見(jiàn)生物活性成分進(jìn)行定性定量分析，結(jié)合體外抗氧化、抗腫瘤實(shí)驗(yàn)對(duì)其生物活性進(jìn)行比較，結(jié)果如下:
　　1.對(duì)香茶藨子葉片中總酚酸、總黃酮的提取工藝參數(shù)進(jìn)行了BBD實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和工藝優(yōu)化，確定了最優(yōu)的負(fù)壓空化輔助低共熔溶劑提取的參數(shù):低共熔溶劑組分:乳酸、氯

2、化膽堿(2∶1，mol/mol);低共熔溶劑含水量:25％;低共熔溶劑與植物粉末液固比:26∶1 mL/g;負(fù)壓壓力:-0.08 MPa;提取溫度:50℃;提取時(shí)間:25 min;提取次數(shù):2。在上述優(yōu)化條件下進(jìn)行了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，香茶蔗子葉片中總酚酸、總黃酮提取量的平均值分別為:95.78 mg/g和33.63 mg/g，提取含量高于超聲輔助低共熔溶劑提取和70％乙醇結(jié)合負(fù)壓空化提取的提取量。
　　2.比較2014年5月～11月采集的

3、7個(gè)時(shí)期點(diǎn)香茶藨子葉片中總酚酸、總黃酮含量，結(jié)果表明7月16日采集的樣品中總酚酸含量最高，8月14日采集的樣品中總黃酮含量最高。建立了沒(méi)食子酸、綠原酸、蘆丁、阿魏酸、異槲皮苷5種常見(jiàn)生物活性成分的HPLC-UV分析檢測(cè)方法:
　　色譜條件:色譜柱:C18(5μm，250×4.6 mm i.d.);流動(dòng)相:0.10％磷酸水溶液(A)-乙腈(B);流速1 mL/min;柱溫為35℃;進(jìn)樣量:10μL;檢測(cè)波長(zhǎng):273 nm和320 n

4、m;梯度洗脫條件:0-6 min，9-18％(B);6-13 min，18-25％(B);13-23 min，25-40％(B);23-25 min,40-60％(B)。
　　測(cè)得不同時(shí)期采集的香茶蔗子葉片中沒(méi)食子酸、異槲皮苷含量最大值出現(xiàn)在7月16日樣品中分別為17.23 mg/mL和1.58 mg/mL;綠原酸、蘆丁含量最大值出現(xiàn)在8月14日樣品中分別為3.68 mg/mL和7.42 mg/mL;阿魏酸含量最大值出現(xiàn)在6月16

5、日樣品中為3.35 mg/mL。
　　3.通過(guò)DPPH自由基清除能力測(cè)定、抑制羥基自由基(·OH)能力測(cè)定和抑制超氧陰離子自由基能力測(cè)定比較不同時(shí)期香茶藨子葉片粗提物的抗氧化活性，三組實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示8月14日采集的茶藨子葉片抗氧化能力最強(qiáng)。測(cè)定不同時(shí)期香茶藨子葉片粗提物對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用結(jié)果表明，8月14日采集的香茶藨子葉片粗提物抗腫瘤活性最強(qiáng)，IC50=0.48 g/mL，并且對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制作用呈時(shí)間

6、-劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)合上一章總酚酸、總黃酮含量的測(cè)定結(jié)果，初步判斷香茶藨子葉片粗提物活性與其總黃酮含量的相關(guān)性高于與總酚酸的相關(guān)性。
　　綜上所述，負(fù)壓空化輔助低共熔溶劑提取非常適用于香茶蔗子葉片中總酚酸、總黃酮的提取，低共熔溶劑作為一種新型提取溶劑，具有穩(wěn)定性好，可生物降解，低毒性，對(duì)不同極性化合物提取能力高等優(yōu)點(diǎn)，可成為提取植物材料中活性成分的綠色溶劑。結(jié)合生物活性實(shí)驗(yàn)及HPLC-UV分析確定香茶蔗子葉片的最佳利用期為8月份，對(duì)