苦蕎總黃酮的提取及體外抗腫瘤活性研究.pdf

1、苦蕎麥中所含的營(yíng)養(yǎng)成分非常復(fù)雜，主要包括生物類黃酮、高活性蛋白、氨基酸、脂肪酸、膳食纖維、微量元素等?？嗍w麥中生物類黃酮的含量較高，其中以蘆丁和槲皮素為主。大量的實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，苦蕎生物類黃酮具有極其廣泛的生理和藥理活性，如抗氧化、清除自由基、抗突變、降血糖、抗炎癥、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等功能，尤其近年來(lái)，其獨(dú)特的抗癌功能越來(lái)越受到人們的關(guān)注。本文對(duì)目前常用的幾種植物總黃酮提取方法進(jìn)行了比對(duì)，建立了采用微波法提取苦蕎總黃酮的方法，并對(duì)苦蕎黃酮

2、的主要生理功能之一----抗腫瘤活性進(jìn)行了初步研究。
　　實(shí)驗(yàn)中采用了熱水浸提法、堿水浸提法、乙醇回流提取法、微波提取法和超聲輔助提取法五種不同的提取方法從苦蕎種子粉末中得到了總黃酮，使用高壓液相色譜法對(duì)提取物中的總黃酮進(jìn)行了定性定量的檢測(cè)。結(jié)果表明，乙醇回流提取法提取總黃酮產(chǎn)率最高，微波和超聲波提取法次之，堿水和熱水浸提法總黃酮產(chǎn)率最低。微波法提取產(chǎn)率高，耗時(shí)短，具有明顯的高效性，適合大規(guī)模提取苦蕎生物類黃酮。
　　利用M

3、TT法檢測(cè)苦蕎總黃酮對(duì)食管癌EC9706和宮頸癌HeLa細(xì)胞的毒性效果，結(jié)果表明，苦蕎總黃酮能明顯抑制兩株細(xì)胞的增殖，并且作用效果呈時(shí)間和劑量依賴性。在光學(xué)倒置顯微鏡下觀察，可見(jiàn)細(xì)胞核固縮，形成多個(gè)膜包的凋亡小體。
　　利用DAPI染色檢測(cè)EC9706和HeLa細(xì)胞經(jīng)苦蕎黃酮處理后的形態(tài)變化，電鏡觀察細(xì)胞核，可見(jiàn)多個(gè)凋亡小體，表明苦蕎黃酮誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生了凋亡。經(jīng)Annexin-Ⅴ/PI染色后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞出現(xiàn)晚期凋亡，并

4、且凋亡率與黃酮?jiǎng)┝砍烧嚓P(guān)。此外，加入不同的檢測(cè)試劑后，用流式細(xì)胞術(shù)觀察其對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞內(nèi)ROS水平的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果表明，苦蕎黃酮引起了EC9706和HeLa細(xì)胞的G2/M期周期停滯，且細(xì)胞內(nèi)ROS水平呈濃度依賴性增加。Western雜交實(shí)驗(yàn)初步顯示，苦蕎黃酮能上調(diào)細(xì)胞內(nèi)的促凋亡蛋白Bax以及下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量。
　　以上結(jié)果表明，苦蕎黃酮對(duì)食管癌EC9706和宮頸癌HeLa細(xì)胞都具有明顯的增殖抑制效果，為進(jìn)一步開(kāi)