苦蕎總黃酮的提取及體外抗腫瘤活性研究.pdf

1、苦蕎麥中所含的營養(yǎng)成分非常復(fù)雜，主要包括生物類黃酮、高活性蛋白、氨基酸、脂肪酸、膳食纖維、微量元素等?？嗍w麥中生物類黃酮的含量較高，其中以蘆丁和槲皮素為主。大量的實驗已經(jīng)證實，苦蕎生物類黃酮具有極其廣泛的生理和藥理活性，如抗氧化、清除自由基、抗突變、降血糖、抗炎癥、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫等功能，尤其近年來，其獨特的抗癌功能越來越受到人們的關(guān)注。本文對目前常用的幾種植物總黃酮提取方法進行了比對，建立了采用微波法提取苦蕎總黃酮的方法，并對苦蕎黃酮

2、的主要生理功能之一----抗腫瘤活性進行了初步研究。
　　實驗中采用了熱水浸提法、堿水浸提法、乙醇回流提取法、微波提取法和超聲輔助提取法五種不同的提取方法從苦蕎種子粉末中得到了總黃酮，使用高壓液相色譜法對提取物中的總黃酮進行了定性定量的檢測。結(jié)果表明，乙醇回流提取法提取總黃酮產(chǎn)率最高，微波和超聲波提取法次之，堿水和熱水浸提法總黃酮產(chǎn)率最低。微波法提取產(chǎn)率高，耗時短，具有明顯的高效性，適合大規(guī)模提取苦蕎生物類黃酮。
　　利用M

3、TT法檢測苦蕎總黃酮對食管癌EC9706和宮頸癌HeLa細胞的毒性效果，結(jié)果表明，苦蕎總黃酮能明顯抑制兩株細胞的增殖，并且作用效果呈時間和劑量依賴性。在光學(xué)倒置顯微鏡下觀察，可見細胞核固縮，形成多個膜包的凋亡小體。
　　利用DAPI染色檢測EC9706和HeLa細胞經(jīng)苦蕎黃酮處理后的形態(tài)變化，電鏡觀察細胞核，可見多個凋亡小體，表明苦蕎黃酮誘導(dǎo)細胞發(fā)生了凋亡。經(jīng)Annexin-Ⅴ/PI染色后，流式細胞儀檢測，發(fā)現(xiàn)細胞出現(xiàn)晚期凋亡，并

4、且凋亡率與黃酮劑量成正相關(guān)。此外，加入不同的檢測試劑后，用流式細胞術(shù)觀察其對細胞周期和細胞內(nèi)ROS水平的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果表明，苦蕎黃酮引起了EC9706和HeLa細胞的G2/M期周期停滯，且細胞內(nèi)ROS水平呈濃度依賴性增加。Western雜交實驗初步顯示，苦蕎黃酮能上調(diào)細胞內(nèi)的促凋亡蛋白Bax以及下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達量。
　　以上結(jié)果表明，苦蕎黃酮對食管癌EC9706和宮頸癌HeLa細胞都具有明顯的增殖抑制效果，為進一步開