大葉藻總黃酮的提取、純化及抗衰老活性的研究.pdf

1、大葉藻(Zostera marina L.)是多年生海草,屬被子植物門,單子葉植物綱,沼生目,隸屬于眼子菜科( Potamogetonaceae)大葉藻屬(Zostera)。大葉藻是海草床的重要組成部分,但迄今為止,在大葉藻的利用方面是很不充分的,僅利用其搭建海草房,這不僅未發(fā)揮其在營養(yǎng)學方面的價值,而且還浪費了大量的海草資源。
　　黃酮類化合物是一類廣泛存在的天然抗氧化劑,研究表明其具有多種生理功能,如降血脂、抗氧化、抗癌等功能

2、。但是對于黃酮化合物的研究一般只限于陸生高等植物,海洋中的高等植物并未被充分開發(fā)利用。
　　本文主要對海洋高等植物——大葉藻,研究其總黃酮的提取、純化及結構鑒定,并研究總黃酮的抗衰老活性,主要研究結果如下:
　　首先進行了大葉藻總黃酮的提取工藝實驗,利用單因素和正交實驗確定了熱水提取工藝和微波輔助提取工藝的最佳條件,并對兩種工藝的最大得率與前人報道的結果進行比較。熱水提取工藝的最佳條件:水浴溫度80℃,料液比1:60(g:m

3、L),提取次數(shù)為5,提取時間1h,大葉藻中總黃酮的得率為4.02％;微波輔助提取工藝的最佳條件:微波功率640W,提取料液比為1:40(g:mL),提取次數(shù)為5,提取時間150s,大葉藻中總黃酮的得率為3.66%。與前人報道的工藝相比較,本研究的兩種工藝優(yōu)于傳統(tǒng)工藝,與超聲輔助浸提工藝相近,但低于酶法輔助浸提工藝。
　　其次,選擇5種大孔吸附樹脂,通過靜態(tài)吸附和解吸實驗,選定兩種最優(yōu)樹脂D101-1和AB-8;再將兩種樹脂混合進行

4、試驗,選出混合吸附樹脂最優(yōu)的混合比例,最后通過靜態(tài)實驗與動態(tài)實驗確定了最佳純化工藝條件:D101-1和AB-8吸附樹脂按質(zhì)量比2:3比例混合,樣液pH為3,樣液質(zhì)量濃度為1.25mg/mL,洗脫液乙醇濃度為70%,上樣體積和上樣流速分別為6BV和3BV/h,洗脫體積和洗脫流速分別為5BV和3BV/h,而且樹脂的重復使用性能比較好。在最佳純化條件下,凍干樣品的總黃酮純度由原來12.66%±0.42%上升至51.25%±1.26%,提高了接

5、近4倍。經(jīng) LC-MS初步判斷純化后的大葉藻總黃酮主要含有木犀草素和香葉木素,并且在大葉藻中首次發(fā)現(xiàn)香葉木素。
　　最后,對大葉藻總黃酮的抗衰老活性進行了研究,頸背部皮下注射D-半乳糖致小鼠衰老,同時灌胃不同劑量的大葉藻總黃酮,觀察大葉藻總黃酮對 D-半乳糖致衰老小鼠的影響。結果表明:第一,大葉藻總黃酮能夠增加 D-半乳糖致衰老小鼠的體重,并且能夠增加衰老小鼠的腦和胸腺指數(shù);第二,大葉藻總黃酮能夠提高D-半乳糖致衰老小鼠的血清、肝

6、臟、腦組織中T-SOD的活力水平,并能夠抑制MDA含量的升高,還可以提高血清和肝臟中的T-AOC以及提高肝臟和腦組織中GSH-PX和CAT的活力水平,從而提高機體的抗氧化能力;第三,大葉藻總黃酮能夠顯著增加D-半乳糖致衰老小鼠肝、腦細胞膜的Na+-K+-ATPase和 Ca2+-Mg2+-ATPase活力水平,提高細胞膜離子的轉運能力;第四,大葉藻總黃酮能夠顯著提高 D-半乳糖致衰老小鼠血清和腦中 ChAT的活性,抑制腦中AChE活性,