硫酸軟骨素酶ABC聯(lián)合超短波治療對脊髓損傷大鼠的功能恢復及膠質(zhì)瘢痕形成的影響.pdf

1、目的：
　　本研究旨在觀察超短波聯(lián)合硫酸軟骨素酶ABC(Chondritinase ABC，ChABC)治療對脊髓損傷后大鼠雙下肢神經(jīng)功能恢復的影響，以及對脊髓損傷后與膠質(zhì)瘢痕形成有關的因子:膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）、硫酸軟骨素蛋白聚糖(chondroitin sulphate proteoglycans，CSPGs)的影響，并觀察其能否進一步抑制膠質(zhì)瘢痕形成及促

2、進神經(jīng)功能恢復。
　　方法：
　　42只8周齡SD大鼠隨機分成2w及4w，共2個觀察時間點;每個觀察時間點又分3組，每組7只。3個組分別是:(1)對照組:每個時間點包括4只單純損傷組和3只損傷后注射PBS溶液組（該組大鼠術后立即經(jīng)微導管注入PBS6μL，以后每天用同樣劑量給藥1次，1周后停藥，拔出微導管）。(2)ChABC治療組:每個時間段7只。術后立即通過微導管注入1U/mL ChABC6μL，以后每天用同樣劑量給藥1次，

3、1周后停藥，拔出微導管。(3)ChABC聯(lián)合超短波治療組:每個時間點7只，術后第二天開始予小劑量超短波治療;每天1次，每次7分鐘，直至取材前一天。ChABC的給藥方式、每次給藥劑量均與ChABC治療組相同。制備大鼠脊髓損傷模型后1d及1w、2w、3w、4w做BBB神經(jīng)行為學評分。術后2w、4w對相應時間點的大鼠取出損傷區(qū)脊髓，儲存標本，做病理切片。應用免疫組織化學SABC法染色對GFAP、CSPGs兩個指標進行免疫組化染色。標本封片后，

4、用裝有圖像采集軟件NIS-Elements F3.0的設備采集圖像，每個標本采集5張。用NIS-Elements Br3.0軟件對所有采集的圖像檢測術后2w、4w脊髓組織中GFAP、CSPGs表達的平均光密度值差異。將每個標本測得的5個平均光密度值取算數(shù)平均值，再將數(shù)據(jù)儲存到表格中，用于統(tǒng)計分析。行為學評分結果和GFAP、CSPGs的平均光密度值結果用統(tǒng)計軟件進行分析，結果以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　神經(jīng)

5、行為學評分:術后1w到4w，各組大鼠的神經(jīng)功能均有提高。聯(lián)合治療組在各時間點的BBB評分均高于對照組，在2w和4w時，差異非常顯著(P＜0.001)，而ChABC治療組僅在術后第4w高于對照組，差異顯著（P＜0.01）;其他各時間點，雖然數(shù)值增高但差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。與ChABC治療組相比，聯(lián)合超短波治療組數(shù)值在各時間點雖有增高，但差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。GFAP、CSPGs免疫組化分析:與對照組相比，術后2

6、w時，ChABC治療組和聯(lián)合超短波治療組的CSPGs平均光密度值均明顯降低(P＜0.01)。術后4w時，對照組CSPGs表達也顯著降低，達到了ChABC治療組和聯(lián)合超短波治療組的水平。術后2w時，ChABC治療組和聯(lián)合超短波治療組的GFAP平均光密度值均比對照組明顯降低(P＜0.01);而對照組GFAP表達相對2w時確有升高，ChABC治療組和聯(lián)合超短波治療組仍保持在術后2w時水平，但與對照組相比，因平均光密度值結果差異較大，而且樣本量

7、不足，差異均無顯著性（P＞0.05）。聯(lián)合治療組和ChABC治療組在術后2個時間點上的GFAP、CSPGs平均光密度值差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：
　　用ChABC治療能明顯有促進SCI后大鼠雙下肢的運動功能恢復。在膠質(zhì)瘢痕形成早期，用ChABC治療能明顯抑制膠質(zhì)瘢痕形成相關的重要因子GFAP和CSPGs。用超短波聯(lián)合治療雖然在抑制GFAP、CSPGs和雙下肢的運動功能恢復上較單純用ChABC治療有更好的