黃芩苷對潰瘍性結(jié)腸炎PI3K-Akt-NF-kB信號通路的影響及其機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進(jìn)行論述：
　　體內(nèi)部分：
　　目的:建立TNBS誘導(dǎo)的大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，確保模型成功，給予不同劑量黃芩苷治療后，分別以柳氮磺胺吡啶(SASP)為對照，考察黃芩苷對大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型組中AKT/NF-kB信號通路的影響。
　　方法:采用Elisa和Western-blot技術(shù)，觀察其對UC大鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-6(白介素6)、IL-8(白介素8)、IL-1（白介素1）含量;以及PI

2、3K蛋白、AKT蛋白、NF-κB(p65)的影響，并分析PI3K/AKT與其他觀察指標(biāo)(NF-κB、TNF-α、IL-6)之間的相互關(guān)系，觀察其抗炎機制與PI3K/AKT通路的相關(guān)性。利用Western-blot技術(shù)，觀察黃芩苷對UC模型大鼠結(jié)腸組織FasL、Caspase9的影響，并分析PI3K/AKT/NF-κB與白FasL、Caspase9之間的相互關(guān)系，觀察其抗凋亡機制與PI3K/AKT/NF-κB通路的相關(guān)性。
　　結(jié)果

3、:與模型組相比，黃芩苷組、柳氮磺胺吡啶組大鼠結(jié)腸組織中TNF-α、IL-6(白介素6)、IL-8(白介素8)、IL-1（白介素1）的分泌量也減少(P＜0.05)，且兩藥聯(lián)合應(yīng)用對TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1的分泌量的減弱效應(yīng)更強(P＜0.01)。與模型組相比，黃芩苷組、柳氮磺胺吡啶組中的PI3K蛋白的磷酸化水平有所減少，磷酸化的Akt水平有所減少(P＜0.05)。與模型組相比，黃芩苷組、柳氮磺胺吡啶組中的Cox-2(環(huán)氧化酶

4、-2)、β-catenin(β連環(huán)蛋白)、Caspase-9(天冬氨酸蛋白水解酶9)、Fasl(人凋亡相關(guān)因子配體)的蛋白表達(dá)減少(P＜0.05)。
　　結(jié)論:黃芩苷能減輕大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的炎癥反應(yīng)，抑制PI3K磷酸化，下調(diào)Akt的活化，從而抑制TNF-α、IL-6等炎癥因子的分泌，發(fā)揮其抗炎效應(yīng)，提示黃芩苷可能通過以抑制Akt的活化、抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位發(fā)揮其抗炎的作用。
　　體外部分：
　　目的:觀察黃芩苷對人結(jié)

5、腸癌上皮細(xì)胞株HT-29的炎癥模型中PI3K/Akt/NF-κB信號通路的影響。
　　方法:以腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)共同誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞，造細(xì)胞炎癥模型。實驗分為7組:空白對照組加入完全培養(yǎng)基孵育，實驗過程中不予任何藥物干預(yù)，模型對照組給予hTNF(20μg·L-1)孵育12h后，再給LPS(1mg· L-1)孵育1

6、5h;陽性藥組在模型組的基礎(chǔ)上，加入SASP(柳氮磺胺吡啶)(500μmol· L-1);黃芩苷組在模型組基礎(chǔ)上給予不同劑量(1、10、100μg·L-1)孵育24h。MTT法檢測不同劑量黃芩苷(1、10、100μg·L-1)對細(xì)胞生長的影響;Western blot法檢測不同劑量黃芩苷(1、10、100μg·L-1)對PI3K(磷脂酰肌醇3激酶)、Akt(絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶)、NF-κB(核轉(zhuǎn)錄因子kappaB)等蛋白表達(dá)，ELIS

7、A法檢測不同劑量黃芩苷(1、10、100μg·L-1)對細(xì)胞上清中TNF-α，IL-6等含量的影響。
　　結(jié)果:與模型組相比，黃芩苷組（1、10、100μg·L-1）、柳氮磺胺吡啶組（500μmol·L-1）的細(xì)胞上清液中TNF-α、IL-6(白介素6)、IL-8(白介素8)、IL-1（白介素1）的分泌量也減少(P＜0.05)，且兩藥聯(lián)合應(yīng)用對TNF-α、IL-6、IL-8、IL-1的分泌量的減弱效應(yīng)更強(P＜0.01)。與模型組

8、相比，黃芩苷組（1、10、100μg·L-1）、柳氮磺胺吡啶組(500μmol·L-1)中的PI3K蛋白的磷酸化水平有所減少，磷酸化的Akt水平有所減少，并且NF-κB的活化入核水平也有所減少(P＜0.05)。與模型組相比，黃芩苷組(1、10、100μg·L-1)、柳氮磺胺吡啶組（500μmol·L-1）中的Cox-2(環(huán)氧化酶-2)、β-catenin(β連環(huán)蛋白)、Caspase-9(天冬氨酸蛋白水解酶9)、Fasl(人凋亡相關(guān)因子