CLP基因的克隆、表達(dá)及生化特性的研究.pdf

1、CLP（Coactosin—like protein）是通過酵母雙雜交方法，利用5’—脂氧合酶（5LO）作為探針，從人肺cDNA文庫中發(fā)現(xiàn)的一個新的人類蛋白。CLP的mRNA廣泛地分布在多種組織中，在胎盤、肺、腎臟以及外周血淋巴白細(xì)胞中大量表達(dá)；而內(nèi)源性CLP則主要定位于骨髓細(xì)胞胞質(zhì)中間。CLP與廣泛存在于真核生物中的肌動蛋白解聚合因子（ADF）家族具有較高的同源性，含有同其它肌動蛋白結(jié)合蛋白相同的特異性的LKKAET序列，并與coac

2、tosin有極高的同源性。自1996年，人們從生物化學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)等角度對CLP展開了系列研究，發(fā)現(xiàn)CLP能上調(diào)5-脂氧合酶的活性，并通過不同結(jié)合位點分別與5-脂氧合酶和肌動蛋白相互作用，參與細(xì)胞骨架運動，對白細(xì)胞的趨化、粘附和吞噬作用等炎癥反應(yīng)進(jìn)行調(diào)控。此外，CLP也可誘發(fā)腫瘤特異性體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。目前，人們對CLP與5LO和F—actin的結(jié)合定位，對靜止和激活細(xì)胞進(jìn)行調(diào)控的機制以及CLP參與腫瘤、哮喘等炎癥性、免疫性疾病的發(fā)生

3、和發(fā)展的分子機制仍需進(jìn)行進(jìn)一步的研究。 本研究從人的肝臟cDNA文庫中經(jīng)PCR擴增得到CLP基因，采用原核表達(dá)系統(tǒng)，對人源CLP蛋白進(jìn)行高效表達(dá)，經(jīng)親和層析和凝膠排阻層析純化得到高純度的CLP蛋白，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行SDS—PAGE、動態(tài)光散射和分析型超速離心等實驗對CLP生化特性進(jìn)行分析。實驗結(jié)果表明：CLP在大腸桿菌中獲得高效、可溶性表達(dá)，經(jīng)多種純化方法獲得高純度的蛋白質(zhì)；動態(tài)光散射實驗顯示：CLP蛋白質(zhì)在溶液中較為穩(wěn)定，主要