山柰素對黑素小鼠皮膚色素影響的研究.pdf

1、黃褐斑是一種臨床常見的色素沉著性皮膚病，多見于東方的中、青年女性，不僅影響容貌，還給患者帶來諸多心理、生活方面的煩惱和痛苦。因其發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明，目前的治療仍是困擾皮膚科醫(yī)生的難題之一。山柰素是近年來從多種植物中提純出的天然中藥單體，具有多種生物活性，如抗菌劑抗炎等作用。此外，我們先期的研究發(fā)現(xiàn)，山柰素對體外不同狀態(tài)的的酪氨酸酶活性都有明顯的抑制作用，呈時效和量效的關(guān)系，在培養(yǎng)的人正常黑素細(xì)胞中，隨著山柰素濃度的升高，對酪氨酸酶及黑

2、素合成的抑制逐漸增強(qiáng)，且對黑素合成抑制作用比國際公認(rèn)的熊果苷要強(qiáng)（P<0.05）。山柰素雖然表現(xiàn)出對黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性的抑制作用，但對其增值卻無明顯的抑制作用，1M時對細(xì)胞增殖出現(xiàn)了促進(jìn)作用，而且發(fā)現(xiàn)，隨著山柰素濃度增高及作用時間的延長，黑素細(xì)胞的樹突有多極向兩極轉(zhuǎn)化的趨勢明顯，由此我們推測山柰素是一種細(xì)胞毒性小，應(yīng)用前景良好的酪氨酸酶抑制劑。山柰素的這一特性也是首次發(fā)現(xiàn)，以“一種山柰素的新制藥用途”申請的國家發(fā)明專利于2012年被國

3、家知識產(chǎn)權(quán)局授予，為進(jìn)一步驗(yàn)證其作用的效果，我們將山柰素外用于黑色小鼠的皮膚，觀察山柰素對黑色小鼠皮膚黑素合成的影響，為進(jìn)一步的臨床應(yīng)用和產(chǎn)品開發(fā)提供依據(jù)。
　　目的：通過對黑色小鼠皮膚外用不同濃度的山柰素，一方面學(xué)習(xí)掌握小鼠的飼養(yǎng)方法和外用藥膏的制作方法，另一方面更重要的是觀察山奈素對黑素小鼠皮膚色素的影響，以驗(yàn)證山柰素在動物模型的作用效果和安全性，為其進(jìn)一步的臨床應(yīng)用和產(chǎn)品開發(fā)打基礎(chǔ)。
　　方法：將60只C57BL黑色小

4、鼠隨機(jī)的分為六組，每組10只。將四種濃度KPF軟膏、只含基質(zhì)的軟膏分別涂抹于小鼠背部約1.5cm×1.5cm大小的區(qū)域，剩下10只小鼠不涂抹任何藥膏，共8周。用藥結(jié)束1周后取小鼠受試皮膚，制作病理切片：1、根據(jù)色素脫失評分標(biāo)準(zhǔn)目測小鼠皮膚色素脫失情況并統(tǒng)計；2、用蘇木精伊紅染色法和免疫組織化學(xué)染色法染色，觀察黑素細(xì)胞形態(tài)并統(tǒng)計黑素細(xì)胞數(shù)量；3、用Modified Lillie's染色法染色，觀察并統(tǒng)計黑素顆粒數(shù)量及其才表皮各層分布情況。

5、對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料如數(shù)據(jù)為正態(tài)分布且方差齊，采用方差分析；如非正態(tài)和或方差不齊，采用非參數(shù)的秩和檢驗(yàn)，并以P<0.05作為具有統(tǒng)計學(xué)意義的判斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：1、小鼠皮膚受山柰素的影響而產(chǎn)生色素脫失，X2=47.012，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；僅在山柰素濃度為15％時色素脫失明顯，呈現(xiàn)均勻分布的色素脫失，其它濃度影響不明顯；2、小鼠表皮黑素細(xì)胞的含量并沒有受到山柰素的明顯影

6、響，F(xiàn)=0.751，差別沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；3、小鼠表皮黑素顆粒的含量受山柰素的影響而降低，F(xiàn)=416.923，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；在5%和15%的濃度下降低的作用明顯，其他濃度影響不明顯；4、小鼠表皮黑素顆粒分布在山柰素的作用下評分等級降低，X2=81.312，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，僅在濃度為5%和15%時作用明顯，其它濃度作用不明顯。
　　結(jié)論：1、山柰素可升高皮膚色素脫失等級，隨著山柰素