葆菁口服液對(duì)黑素合成及黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的影響及機(jī)制.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　本課題運(yùn)用血清藥理學(xué)方法，觀察葆菁口服液含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)人正常黑素細(xì)胞體系中黑素合成，及其對(duì)黑素細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞共培養(yǎng)體系中黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，并探討其作用機(jī)制，為葆菁口服液改善黃褐斑癥狀提供理論依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　血清藥理學(xué)方法制備中藥含藥血清。建立人正常黑素細(xì)胞體外培養(yǎng)體系，分別采用MTT比色法、酪氨酸酶多速率氧化法、NaOH裂解法測(cè)定黑素細(xì)胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素含量，RT-PCR測(cè)

2、定酪氨酸酶mRNA表達(dá)量;建立體外黑素細(xì)胞與角質(zhì)形成細(xì)胞共培養(yǎng)體系，pull-down法檢測(cè)黑素細(xì)胞RhoA及Racl蛋白的表達(dá)情況、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的情況。以維生素C作為對(duì)照組。應(yīng)用SPSS16.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1、 MTT法測(cè)定黑素細(xì)胞增殖，與生理鹽水組相比較，葆菁口服液組、維生素C組對(duì)黑素細(xì)胞的增殖的影響無(wú)明顯差異，組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。NaOH裂解法

3、測(cè)定黑素含量，與生理鹽水組比較，葆菁口服液、維生素C含藥血清可降低黑素合成量，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。多巴氧化法對(duì)酪氨酸酶活性進(jìn)行測(cè)定，與生理鹽水組比較，葆菁口服液組與維生素C組黑素細(xì)胞中黑素合成含量均降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);葆菁口服液組與維生素C組黑素細(xì)胞中黑素合成含量相當(dāng)，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。PCR測(cè)定酪氨酸酶mRNA，三組之間酪氨酸酶mRNA的表達(dá)量差異不明顯，組間差異無(wú)統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、 pull-down法測(cè)定RhoA、Rac1蛋白的表達(dá)，與生理鹽水組比較，葆菁口服液組可上調(diào)RhoA蛋白的表達(dá)，維生素C組可下調(diào)RhoA蛋白的表達(dá)，與生理鹽水組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。葆菁口服液組及維生素組均可下調(diào)Rac1蛋白的表達(dá)，與生理鹽水組對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;且葆菁口服液的下調(diào)作用更為明顯，較維生素C組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。流式測(cè)定黑素轉(zhuǎn)運(yùn)結(jié)果顯示，葆菁口服

5、液組、維生素C組處理后，黑素小體的轉(zhuǎn)運(yùn)率降低，分別為10.32％、20.09％，較生理鹽水組29.43％有明顯下降，以葆菁口服液組最為顯著。
　　結(jié)論：
　　葆菁口服液含藥血清可抑制黑素細(xì)胞中酪氨酸酶的活性，減少黑素的合成，同時(shí)上調(diào)RhoA蛋白的表達(dá)水平，并下調(diào)Rac1蛋白的表達(dá)，抑制黑素細(xì)胞樹(shù)突的生長(zhǎng)，從而減少黑素向角質(zhì)形成細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)。與維生素C比較，二者對(duì)黑素合成的抑制作用相當(dāng)。雖然二者對(duì)及Rac1蛋白的表達(dá)均有抑制作用