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文檔簡介
1、目的:
觀察野生小鼠和脂聯(lián)素基因敲除(APNKO)小鼠是否可導致心臟重構,以及胰島素抵抗(IR)和脂聯(lián)素(APN)缺乏是否可進一步加重所致的心臟重構。
方法:
選擇16只野生 C57小鼠隨機分為對照組(Control組)和胰島素抵抗組(IR組),16只脂聯(lián)素基因敲除小鼠隨機分為脂聯(lián)素基因敲除組(APNKO組)和脂聯(lián)素基因敲除+胰島素抵抗(APNKO+IR組),其中Control組和APNKO組給予普通飼料,
2、其余兩組給予高脂飼料誘導產(chǎn)生胰島素抵抗。飼養(yǎng)各組小鼠12周,測量小鼠體重(BW),給予禁食禁水12小時,采集鼠尾末端測量空腹血糖(FPG),取血清測量用自動生化儀測量血清甘油三酯(TG)及膽固醇(TC)的濃度,用Elisa法測量空腹胰島素(FINS)以及血清APN的濃度,并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。取出心臟,分離左心室,稱取全心重量(HW)以及左心室重量(LVW),并計算全心重量指數(shù)(HWI)和左心重量指數(shù)(LVWI)。用分
3、離的左心室做HE染色觀察心肌結構的改變情況,用Masson染色觀察心肌纖維化的程度,并計算心肌膠原容積分數(shù)(CVF)和血管周圍膠原面積(PVCA)的含量以評價血管周圍纖維化程度。用免疫組化和Western Blot的方法檢測心肌APN及脂聯(lián)素受體1(AdipoR1)、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)的表達水平。采用實時熒光定量PCR法(RT-PCR)測定心肌APN及AdipoR1的mRNA表達。對心肌MMP-9的表達與HOMA-IR、血清
4、APN水平、心肌APN和AdipoR1的關系用相關性分析。
結果:
1、析因分析結果如下。脂聯(lián)素基因敲除與胰島素抵抗對BW、HW、LVW、HWI和LVWI無交互效應(P>0.05)。脂聯(lián)素基因敲除與胰島素抵抗對 FPG、FINS、CVF、PVCA、血清及心肌APN,心肌APN受體1、心肌MMP-9有交互效應(P>0.05)。
2、HE染色:Control組小鼠可觀察到排列整齊、形態(tài)正常、界限清晰的心肌細胞及
5、胞間結構。IR組和APNKO組小鼠心肌細胞胞間結構界限模糊,排列紊亂。而APNKO+IR組心肌細胞核固縮,碎裂,溶解,消失,胞間界限更加模糊,心肌細胞排列更加紊亂,并出現(xiàn)炎性細胞浸潤。
3、Masson染色:與Control組相比較,IR組和APNKO組CVF和PVCA顯著增大,與IR組和APNKO組比較,APNKO+IR組CVF和PVCA顯著增多。
4、免疫組化:
(1)心肌APN和AdipoR1陽性染色
6、結果為棕黃色,主要分布為心肌細胞膜和細胞質。與Control組比較,IR組小鼠心肌APN和AdipoR1表達減低。與IR組比較,APNKO組小鼠心肌APN和AdipoR1蛋白表達水平均顯著降低(P>0.05)。APNKO+IR組心肌APN和AdipoR1表達明顯降低,與IR組和APNKO組比較差異顯著;
(2)心肌MMP-9陽性染色結果為棕黃色,主要分布為心肌細胞膜、細胞質和血管周邊基質細胞。與Control組比較,IR組小鼠
7、心肌MMP-9表達增加。與IR組比較,APNKO組小鼠心肌MMP-9蛋白表達水平均顯著增加(P<0.05)。APNKO+IR組心肌MMP-9表達明顯增加,與IR組和APNKO組比較差異顯著。
5、Western Blot:可見各組心肌均表達MMP-9、APN及其受體1,其中,與Control組相比,IR組和APNKO組心肌MMP-9表達增加,APN和AdipoR1表達減少。IR組和APNKO組比較,APNKO+IR組心肌MMP
8、-9表達顯著增加,APN和AdipoR1表達顯著減少。
6、實時熒光定量PCR法:與Control組比,IR組心肌APN mRNA表達明顯降低,與IR組相比,APNKO組心肌APN及AdipoR1的mRNA表達進一步降低,與APNKO組相比,APNKO+IR組APN及AdipoR1的mRNA在心肌組織中表達明顯降低(P<0.05)。
7、Pearson相關顯示:心肌MMP-9與HOMA-IR呈正相關(P<0.05),
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