RhoC和ROCK1在皮膚惡性黑素瘤中的表達(dá).pdf

1、背景：
　　原發(fā)性皮膚惡性黑素瘤(primary cutaneous malignant melanoma，PCMM)是一種高度惡性的皮膚腫瘤，也是臨床常見的皮膚腫瘤之一，其發(fā)病率低，隨著社會(huì)環(huán)境惡化、生活習(xí)慣改變及人口的老齡化，近年來黑素瘤的發(fā)病也逐年成倍增長(zhǎng)，每年約2萬新發(fā)病例。因?yàn)槟[瘤的惡性程度較高，通過淋巴或血道轉(zhuǎn)移發(fā)生早，而轉(zhuǎn)移后治療效果較差導(dǎo)致死亡率高，故黑素瘤早期診斷、早期治療對(duì)整個(gè)病情的控制及預(yù)后很重要。RhoC(

2、Ras homology C)蛋白是小分子G蛋白超家族中的Rho亞族的蛋白之一,也在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起到重要的作用。細(xì)胞的分裂增殖、細(xì)胞骨架的活動(dòng)、細(xì)胞的活動(dòng)性、腫瘤血管生成及細(xì)胞周圍基質(zhì)的降解等，這些過程對(duì)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有十分重要的作用，RhoC可通過對(duì)下游靶效應(yīng)分子作用調(diào)節(jié)影響上述過程。研究表明RhoC在乳腺癌、卵巢癌、食管鱗狀細(xì)胞癌、胰腺癌、胃癌、肝癌等多種惡性腫瘤中的表達(dá)上調(diào)，并與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的程度相關(guān)。Rho相關(guān)卷曲螺旋形成

3、蛋白激酶(Rho associated coiled coil forming protein kinase，ROCK)作為RhoC蛋白的下游效應(yīng)分子之一，屬于絲氨酸/蘇氨酸家族蛋白激酶的重要成員之一，通過依靠GTP與Rho家族蛋白相互結(jié)合，在多種細(xì)胞生物學(xué)過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，參與肝癌、胃癌、食管鱗癌等多種腫瘤的發(fā)展過程。
　　研究表明RhoC和ROCK1在多種腫瘤中發(fā)揮重要生物學(xué)功能，且兩者之間具有相似的調(diào)節(jié)特性，但二者是

4、否參與黑素瘤的發(fā)展過程國(guó)內(nèi)暫無研究報(bào)道。為此，本文采用免疫組織化學(xué)SP法，分別觀察RhoC與ROCK1在皮膚惡性黑素瘤及痣細(xì)胞痣組織中的表達(dá)情況及二者與黑素瘤臨床病理特征的關(guān)系，初步探討RhoC與ROCK1在黑素瘤發(fā)病機(jī)制過程中的可能發(fā)揮的作用及表達(dá)相關(guān)性。
　　目的：
　　分別檢測(cè)RhoC、ROCK1在皮膚惡性黑素瘤及痣細(xì)胞痣組織中的表達(dá)，對(duì)兩者在皮膚惡性黑素瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中的可能發(fā)揮的作用及兩者之間的相互關(guān)系進(jìn)行探討

5、。
　　材料與方法：
　　1.材料來源：隨機(jī)取于2007至2014年鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科存檔的臨床及病理資料完善的90例原發(fā)性皮膚黑素細(xì)胞腫瘤（皮膚及淋巴組織蠟塊標(biāo)本），其中60例原發(fā)性皮膚惡性黑素瘤，痣細(xì)胞痣30例。根據(jù)患者的臨床及病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，包括年齡、病程、Clark分級(jí)及TNM分期等,
　　2.方法：采用免疫組化SP法檢測(cè)60例黑素瘤組織和30例痣細(xì)胞痣組織中RhoC、ROCK1蛋白的表達(dá)，具體步

6、驟參照試劑盒說明。陰性對(duì)照用PBS代替一抗。RhoC和ROCK1陽性對(duì)照由試劑公司提供。
　　3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)采用 SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。采用x2檢驗(yàn)對(duì)RhoC、ROCK1蛋白在原發(fā)黑素瘤、轉(zhuǎn)移黑素瘤和痣細(xì)胞痣組織中的陽性率進(jìn)行分析，相關(guān)性分析采用spearman相關(guān)分析法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α＝0.05。
　　結(jié)果：
　　1.RhoC蛋白在皮膚惡性黑素瘤、痣細(xì)胞痣組織中的表達(dá)
　　RhoC陽性表達(dá)主要

7、定位于細(xì)胞漿和(或)細(xì)胞膜，呈棕黃或黃褐色顆粒，以彌漫性分布為主。RhoC在皮膚惡性黑素瘤、痣細(xì)胞痣組織中的陽性率分別為70.00％、16.67%。RhoC在黑素瘤組織中為陽性表達(dá)，在受累淋巴結(jié)中陽性表達(dá)，在痣細(xì)胞痣組織中為極弱性表達(dá)，皮膚惡性黑素瘤組與痣細(xì)胞痣組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=22.801，P=0.000）。
　　2.ROCK1蛋白在皮膚惡性黑素瘤、痣細(xì)胞痣組織中的表達(dá)
　　ROCK1陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿

8、和(或)細(xì)胞膜，呈棕黃或黃褐色顆粒，以彌漫性分布為主。ROCK1在皮膚惡性黑素瘤和痣細(xì)胞痣組織中的陽性率分別為81.67%、13.33%。ROCK1蛋白在黑素瘤組織中為陽性表達(dá)，在受累淋巴結(jié)中陽性表達(dá)，在痣細(xì)胞痣組織中為極弱性表達(dá)，皮膚惡性黑素瘤組與痣細(xì)胞痣組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=38.575，P=0.000）。
　　3.RhoC蛋白表達(dá)與皮膚惡性黑素瘤臨床病理的關(guān)系
　　60例CMM中ClarkⅠ-Ⅲ級(jí)陽性率為56

9、.25%（18/32）；Ⅳ～Ⅴ級(jí)陽性率為85.71%（24/28），明顯高于前者（P＜0.05）。TNMⅠ-ⅢA陽性率為58.82%（20/34）；ⅢB-Ⅴ期陽性率為84.62%（22/26），明顯高于Ⅰ-ⅢA期（P＜0.05）。伴有遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組RhoC陽性率為76.92%（10/13）,無遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組RhoC陽性率為68.09%（32/47），兩組之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　4.ROCK1蛋白表達(dá)與皮膚惡

10、性黑素瘤臨床病理的關(guān)系
　　60例CMM中Clark分級(jí)Ⅰ～Ⅲ級(jí)陽性率為75.00%（24/32）；Ⅳ～Ⅴ級(jí)陽性率為92.86%（25/28），明顯高于前者（P＜0.05）。TNM分期中Ⅰ-ⅢA期陽性率為73.53%（25/34）；ⅢB-Ⅴ期中陽性率為92.31%（24/26），明顯高于Ⅰ-ⅢA期（P＜0.05）。伴有遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組ROCK1陽性率為84.61%（11/13），無遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組ROCK1陽性率為80.85%（3

11、8/47），兩組無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　5.RhoC蛋白與ROCK1蛋白表達(dá)的相關(guān)性
　　經(jīng)spearman相關(guān)分析得出，黑素瘤組織中 RhoC蛋白與ROCK1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.348, P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.RhoC、ROCK1在皮膚惡性黑素瘤組織中的表達(dá)均較痣細(xì)胞痣組織明顯升高，提示二者可成為MM潛在標(biāo)志物。
　　2.RhoC、ROCK1的表達(dá)水平均與皮膚惡性黑素