四種人參三醇組皂苷對(duì)小鼠骨髓MSC體外生長(zhǎng)的影響及相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)的研究.pdf

1、研究背景及目的：人參皂苷對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的藥理作用鮮見報(bào)道。已有研究表明，人參皂苷的脫糖基化可能與其藥理活性密切相關(guān)。本部分工作旨在研究人參三醇組皂苷對(duì)體外培養(yǎng)條件下小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）增殖的影響，并分析脫糖基化與人參三醇組皂苷藥理活性的關(guān)系，以期更進(jìn)一步認(rèn)識(shí)人參皂苷的藥理作用機(jī)制。 方法：進(jìn)行小鼠骨髓MSC原代和傳代培養(yǎng)，分組在MSC培養(yǎng)體系中加入人參三醇組皂苷Re、Rg1、Rh1、ppt，測(cè)定MSC集落形成率和細(xì)

2、胞數(shù)，自行設(shè)計(jì)和制作了貼于培養(yǎng)板底部的膠片，此網(wǎng)格用于細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)的定位，用目鏡網(wǎng)格計(jì)數(shù)細(xì)胞。目鏡網(wǎng)格單元方格的平均細(xì)胞計(jì)數(shù)除以方格的面積，再乘培養(yǎng)孔底面積，從而計(jì)算出一個(gè)孔的細(xì)胞總數(shù)。MTT比色試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞活力，實(shí)時(shí)定量RT—PCR檢測(cè)CDK2、cyclinE、p21 mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：體外培養(yǎng)體系中，人參皂苷Rh1在10μmol/L～20μmol/L的濃度范圍內(nèi)，MSC集落產(chǎn)率顯著減低；濃度為20μmol/L時(shí)，MSC

3、傳代擴(kuò)增細(xì)胞數(shù)明顯減少；濃度在5μmol/L～20μmol/L范圍內(nèi)，MSC傳代細(xì)胞的MTT試驗(yàn)吸光值明顯低于對(duì)照組。ppt為20μmol/L時(shí)，MSC集落產(chǎn)率顯著減低，MSC傳代細(xì)胞的MTT試驗(yàn)吸光值明顯減小。然而，在人參皂苷Re和Rg1實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間，以上三種實(shí)驗(yàn)指標(biāo)均無(wú)明顯差異。在培養(yǎng)體系中人參皂苷Re、Rg1、Rh1、ppt為10μmol/L時(shí)，MSC傳代細(xì)胞的cyclin E mRNA表達(dá)水平明顯下降，而CDK2和p21