人參總皂苷對(duì)PC12細(xì)胞分化的影響及作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究人參總皂苷(Total saponin of panax ginseng,TSPG)誘導(dǎo)PC12細(xì)胞神經(jīng)元性分化的作用。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)與TSPG誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞分化的關(guān)系。
　　 方法：體外培養(yǎng)PC12細(xì)胞,觀察其在不同濃度TSPG(0mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L)作用下

2、,細(xì)胞發(fā)生的形態(tài)學(xué)改變。藥物作用2d后通過(guò)透射電鏡觀察分化細(xì)胞間突觸連接形成情況,3d后通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)法,觀察MAP-2及GAP-43在TSPG誘導(dǎo)分化的PC12細(xì)胞中的表達(dá),Western blotting法檢測(cè)分化細(xì)胞中MAP-2及GAP-43蛋白水平。通過(guò)上述檢測(cè)以鑒定TSPG誘導(dǎo)的分化細(xì)胞。為了探索與TSPG促分化有關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,運(yùn)用Western blotting法觀察經(jīng)不同濃度TSPG作用后,PC12細(xì)胞ERK1/2活

3、性的變化。運(yùn)用ERK1/2特異性的抑制劑PD98059與TSPG共培養(yǎng)PC12細(xì)胞,分析ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在TSPG促PC12細(xì)胞神經(jīng)元性分化中的作用。
　　 結(jié)果：⑴TSPG作用后的PC12細(xì)胞其突起長(zhǎng)度和細(xì)胞直徑較對(duì)照組增長(zhǎng)和增大,各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞分化率明顯提高,這種變化存在著劑量反應(yīng)關(guān)系,以40mg/L組最為明顯。各濃度組PC12細(xì)胞均出現(xiàn)MAP-2、GAP-43標(biāo)記陽(yáng)性的分化細(xì)胞,且MAP-2、GAP-43蛋白的表達(dá)