川芎嗪及辛伐他汀對(duì)高糖狀態(tài)下人腹膜間皮細(xì)胞t-PA和PAI-1分泌與表達(dá)的影響.pdf

1、背景：腹膜透析（Peritoneal dialysis，PD）為腎臟替代治療的一種方式，有較好地保護(hù)殘余腎功能、中分子物質(zhì)濾過效果好、可在家自行治療等優(yōu)點(diǎn)，近年來成為部分終末期腎衰竭患者的首選腎臟替代治療方式。但隨著腹膜透析的持續(xù)進(jìn)行，腹膜纖維化(peritonealfibrosis，PF)逐漸出現(xiàn)并日漸加重，為腹膜透析常見并發(fā)癥，其影響代謝廢物及水分的超濾，致使肌酐、尿素、胍類等毒素的清除效率下降，患者最終選擇退出腹膜透析，改行其他替

2、代治療。在腹膜纖維化發(fā)生時(shí)，腹膜中細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)大量沉積，腹膜血管過度增生，腹膜間皮細(xì)胞損傷，纖維化逐漸加重。截止目前的研究已表明，高糖、低PH值、高滲透壓的腹膜透析液及其中的葡萄糖降解產(chǎn)物長期作用于腹膜以及反復(fù)發(fā)作的腹膜透析相關(guān)腹膜炎均可誘導(dǎo)致纖維化細(xì)胞因子如TGF-β、FGF、VEGF等的分泌，細(xì)胞外基質(zhì)大量沉積，血管增生，腹膜纖維化出現(xiàn)及加重。既往研究表明，組織型纖溶酶原激活物(t-

3、PA)、纖溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)是人體正常生命活動(dòng)所必需的細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)體內(nèi)的纖溶過程，同時(shí)其分泌及表達(dá)在腹膜纖維化過程中也有重要影響，可干預(yù)腹膜纖維化的發(fā)生、發(fā)展。
　　目的：該研究通過觀察川芎嗪和辛伐他汀對(duì)高糖誘導(dǎo)后的人腹膜間皮細(xì)胞(humanperitoneal mesothelial cells，HPMCs)中t-PA、PAI-1的分泌及表達(dá)，進(jìn)一步探討上述兩種藥物對(duì)上述指標(biāo)變化的影響機(jī)制，為腹膜纖維化的預(yù)

4、防及治療提供理論依據(jù)。
　　方法：所用人體腹膜來自鼓樓醫(yī)院腹部手術(shù)（非尿毒癥、腹膜炎）患者，經(jīng)胰蛋白酶消化、分離后得到腹膜間皮細(xì)胞，再進(jìn)行原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)，第三代細(xì)胞用于本實(shí)驗(yàn)，各次實(shí)驗(yàn)均使用3名患者的腹膜間皮細(xì)胞實(shí)施3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。用培養(yǎng)液同步48h后，將HPMCs分為8組（每組設(shè)3個(gè)樣木）觀察:空白對(duì)照組（N組，完全培養(yǎng)液），高糖誘導(dǎo)組（H組，2.5％葡萄糖），低劑量辛伐他汀組（高糖+2.5μ mol/L辛伐他汀）、中劑量辛伐

5、他汀組(S2組，高糖+5.0μ mol/L辛伐他汀)、高劑量辛伐他汀組（S3組，高糖+10.0μ mol/L辛伐他?。⒌蛣┝看ㄜ亨航M(T1組，高糖+川芎嗪10mg/L)、中劑量川芎嗪組(T2組，高糖+川芎嗪20mg/L)、高劑量川芎嗪組(T3組，高糖+川芎嗪40mg/L)。MTT法檢測(cè)各組HPMCs的活性，RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)t-PA和PAI-1的表達(dá)， ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液中 t-PA和PAI-1蛋白質(zhì)水平，細(xì)胞部分用BC

6、A蛋白檢測(cè)法測(cè)定細(xì)胞蛋白質(zhì)表達(dá)量，以此校正ELISA結(jié)果。
　　結(jié)果：①高糖誘導(dǎo)組和空白組比較，高濃度葡萄糖能明顯降低腹膜間皮細(xì)胞活性(P＜0.01)，同時(shí)腹膜間皮細(xì)胞中t-PA生成減少和PAI-1的表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.01）;②與高糖誘導(dǎo)組比較，辛伐他汀干預(yù)組腹膜間皮細(xì)胞的活性明顯升高(P＜0.01），t-PA生成增加、PAI-1生成顯著減少(P＜0.01），t-PA mRNA表達(dá)水平顯著增加、PAI-1 mRNA表達(dá)水平顯著降低

7、(P＜0.01)，在蛋白及基因水平上，兩者均與辛伐他汀存在量效關(guān)系;③與高糖誘導(dǎo)組比較，川芎嗪干預(yù)組腹膜間皮細(xì)胞活性明顯升高(P＜0.01），川芎嗪各干預(yù)組（T1、T2、T3組）腹膜間皮細(xì)胞活性明顯升高(P＜0.01）， T1、T2、T3組中t-PA的表達(dá)量增加，PAI-1的表達(dá)量均明顯降低(P＜0.01），t-PA mRNA表達(dá)均明顯上調(diào)、PAI-1 mRNA表達(dá)明顯降低(P＜0.01），在蛋白和基因水平上，兩者也與川芎嗪有量效關(guān)系。