川芎嗪對高糖或TNFα誘導(dǎo)后人腹膜間皮細胞IL6和IL8表達影響實驗研究.pdf

1、[背景]腹膜透析為終末期腎臟病患者替代治療的重要手段之一,其主要并發(fā)癥是腹膜纖維化。細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,ECM)的過渡沉積為腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維化主要特點。既往研究表明,常規(guī)高糖透析液可上調(diào)致纖維化細胞生長因子如IL-6和IL-8的表達,而后兩者是重要的細胞因子,可導(dǎo)致腹膜纖維化。
　　 [目的]本研究通過觀察川芎嗪對體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細胞(humanperitonealmesothelial

2、cells,HPMCs)在高糖及TNFα誘導(dǎo)后IL-6和IL-8分泌與表達的影響,進一步研究和探討川芎嗪對HPMCs在高糖或TNFα誘導(dǎo)后致纖維化細胞生長因子表達的干預(yù)作用及其機制,為臨床上腹膜纖維化的防治提供理論和實驗依據(jù)。
　　 [方法]取自南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院普外科擇期腹部手術(shù)患者(排除尿毒癥和腹膜炎)捐獻的大網(wǎng)膜組織,采用胰蛋白酶法分離腹膜間皮細胞進行原代培養(yǎng)并傳代,第三代細胞用于實驗,每次實驗均由來自3個患者的標

3、本進行3次獨立實驗。用含1％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液同步24h后,試驗分高糖環(huán)境和腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)的炎癥環(huán)境兩部分進行,分組情況如下:
　　 ①高糖環(huán)境下:HPMCs分為五組(每組設(shè)3個樣本)觀察:空白對照組(完全培養(yǎng)液),高糖(2.5％葡萄糖)誘導(dǎo)組,高糖(2.5％葡萄糖)加低、中、高劑量川芎嗪(10mg/L、20mg/L和40mg/L)組。采用單四唑(monotetrazolium,MTT)法檢測各組間皮細胞的活性

4、;半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Semi-quantitativereversetranscriptive-polymerasechainreaction,RT-PCR)法檢測細胞內(nèi)IL-6和IL-8mRNA表達;酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)法檢測細胞上清液中IL-6和IL-8蛋白質(zhì)水平,細胞部分用二喹啉甲酸(bicinchoninicacid,BCA)蛋白檢測法測定細胞蛋白質(zhì)

5、含量,用以校正ELISA結(jié)果。
　　 ②TNFα誘導(dǎo)下:HPMCs分為五組(每組設(shè)3個樣本)觀察:空白對照組(完全培養(yǎng)液),TNFα誘導(dǎo)組,TNFα加低、中、高劑量川芎嗪(10mg/L、20mg/L和40mg/L)組。采用單四唑(monotetrazolium,MTT)法檢測各組間皮細胞的活性;半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Semi-quantitativereversetranscriptive-polymerasechainre

6、action,RT-PCR)法檢測細胞內(nèi)IL-6和IL-8mRNA表達;酶聯(lián)免疫吸附測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)法檢測細胞上清液中IL-6和IL-8蛋白質(zhì)水平,細胞部分用二喹啉甲酸(bicinchoninicacid,BCA)蛋白檢測法測定細胞蛋白質(zhì)含量,用以校正ELISA結(jié)果。
　　 [結(jié)果]①高糖環(huán)境下:與空白對照組比較,高糖能顯著降低HPMCs活性(P＜0.01),并顯著

7、上調(diào)HPMCsIL-6和IL-8的表達(P＜0.01);與高糖誘導(dǎo)組比較,川芎嗪干預(yù)組HPMCs活性顯著升高(P＜0.05),上清液中的IL-6和IL-8含量顯著降低(P＜0.05,P＜0.01),IL-6mRNA和IL-8mRNA表達水平均顯著下調(diào)(P＜0.05),且兩者在蛋白和基因水平與川芎嗪呈量效關(guān)系;
　　 ②炎癥狀態(tài)下:與空白對照組比較,TNFα能顯著降低HPMCs活性(P＜0.01),并顯著上調(diào)HPMCsIL-6和I

8、L-8的表達(P＜0.01);與TNFα誘導(dǎo)組比較,低劑量川芎嗪干預(yù)組HPMCs活性有所升高,但不具統(tǒng)計學意義(P＞0.05),中、高劑量川芎嗪干預(yù)組HPMCs活性顯著升高(P＜0.05),低、中、高劑量川芎嗪干預(yù)組上清液中的IL-6和IL-8含量顯著降低(P＜0.05,P＜0.01),IL-6mRNA和IL-8mRNA表達水平均顯著下調(diào)(P＜0.05),且兩者在蛋白和基因水平與川芎嗪呈量效關(guān)系;
　　 [結(jié)論]川芎嗪能下調(diào)高糖