辛伐他汀及川芎嗪對TNFα誘導后人腹膜間皮細胞t-PA和PAI-1表達影響的實驗研究.pdf

1、背景：腹膜纖維化是腹膜透析的主要并發(fā)癥，是以細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的過渡沉積為特點。既往研究表明反復發(fā)作的腹膜炎可產(chǎn)生炎癥介質(zhì)，誘導細胞外基質(zhì)積聚，最終導致腹膜纖維化，而組織型纖溶酶原激活物(t-PA)和纖溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)的表達在這一過程中起著重要作用。
　　 目的：本研究通過觀察辛伐他汀和川芎嗪對體外培養(yǎng)的人腹膜間皮細胞(human peritoneal mesot

2、helial cells，HPMCs)在腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導后t-PA和PAI-1表達的影響，進一步研究和探討辛伐他汀和川芎嗪對在炎癥狀態(tài)下HPMCs中t-PA和PAI-1表達的影響及其機制，為臨床上腹膜纖維化的防治提供理論和實驗依據(jù)。
　　 方法：取自南京大學醫(yī)學院附屬鼓樓醫(yī)院普外科擇期腹部手術患者（排除尿毒癥和腹膜炎）捐獻的大網(wǎng)膜組織，采用胰蛋白酶法分離腹膜間皮細胞進行原代培養(yǎng)并傳代，第三代細胞用于實驗，每次實

3、驗均由來自3個患者的標本進行3次獨立實驗。用含1％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液同步24h后，HPMCs分為八組（每組設3個樣本）觀察：空白對照組（完全培養(yǎng)液），單純TNF-α(1000ng/L)誘導組，TNF-α(1000ng/L)誘導加低、中、高劑量辛伐他汀(2.5、5和10μmol/L)組，和TNF-α(1000ng/L)誘導加低、中、高劑量川芎嗪(10、20和40mg/L)組，采用單四唑(monotetrazolium，MTT

4、)法檢測各組間皮細胞的活性；半定量逆轉錄聚合酶鏈反應(Semi-quantitative reverse transcriptlve-polymerase chain reaction，RT-PCR)法檢測細胞內(nèi)t-PA和PAI-1的表達；酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測細胞上清液中t-PA和PAI-1蛋白質(zhì)水平，細胞部分用二喹啉甲酸(bicinchoninicac

5、id，BCA)蛋白檢測法測定細胞蛋白質(zhì)含量，用以校正ELISA結果。
　　 結果：①與空白對照組比較，TNF-α能顯著降低HPMCs活性(P＜0.01)，同時HPMCst-PA生成減少和PAI-1的表達增強(P＜0.01)；②與TNF-α誘導組比較，辛伐他汀干預組HPMCs活性顯著升高(P＜0.01)，上清液中的t-PA含量增加和PAI-1含量顯著下降(P＜0.01)，t-PAmRNA表達水平顯著上升和PAI-1mRNA表達水平

6、顯著下調(diào)(P＜0.01)，且兩者在蛋白和基因水平均與辛伐他汀呈量效關系；③與TNF-α誘導組比較，低劑量川芎嗪干預組HPMCs活性有所升高，但不具統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，中、高劑量川芎嗪干預組HPMCs活性顯著升高(P＜0.05，P＜0.01)，上清液中的低、中、高劑量川芎嗪組上清液中t-PA的含量增加，PAI-1的含量顯著降低(P＜0.01)，t-PAmRNA表達水平顯著上升和PAI-1mRNA表達水平均顯著下調(diào)(P＜0.01)，