雷帕霉素對(duì)大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注所致視網(wǎng)膜損傷中基質(zhì)金屬蛋白MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討雷帕霉素對(duì)視網(wǎng)膜缺血再灌注所致視網(wǎng)膜損傷的保護(hù)作用和機(jī)制，及其保護(hù)效果是否通過降低基質(zhì)金屬蛋白MMP-9的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。
　　方法:按隨機(jī)分組的原則將81只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為3組:空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組，每組27只。所有大鼠均取右眼為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組行前房灌注，建立視網(wǎng)膜缺血再灌注(retinal ischemia-reperfusion，RIR)模型。實(shí)驗(yàn)組在前房灌注前2h按2mg/kg

2、的劑量腹腔注射雷帕霉素。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組大鼠腹腔注射等量的生理鹽水和二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide，DMSO)。分別在灌注前，灌注后0h、6h、12h、24h、48h取視網(wǎng)膜標(biāo)本，HE染色光鏡觀察視網(wǎng)膜組織變化;提取total RNA并進(jìn)行熒光定量實(shí)時(shí)PCR(quantitative Real time PCR，qRT-PCR)，檢測(cè)三組中MMP-9 mRNA不同時(shí)間點(diǎn)，在視網(wǎng)膜組織上的表達(dá)水平的變化;進(jìn)一步應(yīng)用Wester

3、n Blotting法檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷后，MMP-9蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:(1)HE染色顯示視網(wǎng)膜缺血再灌注后早期，視網(wǎng)膜內(nèi)層水腫增厚，晚期視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目減少及視神經(jīng)纖維層萎縮變薄。雷帕霉素治療組組織變化趨勢(shì)與缺血組相似，細(xì)胞數(shù)目減少及視網(wǎng)膜厚度變薄的程度均較缺血組有明顯改善。(2) MMP-9的表達(dá)自再灌注后6小時(shí)開始增加，24小時(shí)后達(dá)到高峰(mRNA和蛋白質(zhì)的相對(duì)含量分別為7.6±0.16和5.6