辛伐他汀對大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注中BcL-2和Bax表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　1.采用夾閉大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈的方法，建立視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型。觀察缺血再灌注后視網(wǎng)膜各層形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化、Bcl-2(The B-cellleukemia/lymphoma-2)和Bax(Bcl-2-Associated X)的變化趨勢以及視網(wǎng)膜細(xì)胞的凋亡情況。
　　2.初步探討辛伐他汀在大鼠眼部缺血再灌注損傷中的作用，為將來治療眼部缺血再灌注損傷提供新的理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用夾閉頸總

2、動(dòng)脈的方法造模。選取健康成年SD雄性大鼠165只，數(shù)字表法隨機(jī)分為對照(CON)組、模型(MOD)組和藥物（SIM）組，每組55只，每組分4h、8h、16h、24h、48h，總共5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，各時(shí)間點(diǎn)11只。模型組、藥物組夾閉右側(cè)頸總動(dòng)脈，對照組暴露右頸總動(dòng)脈不夾閉。
　　2.分別在處理4h、8h、16h、24h、48h后對對照(CON)組、模型(MOD)組和藥物(SIM)組大鼠脫頸處死，制作眼球標(biāo)本行HE染色觀察視網(wǎng)膜各層形態(tài)結(jié)構(gòu)

3、的變化，免疫組織化學(xué)染色檢測Bcl-2和Bax的蛋白表達(dá)水平，提取視網(wǎng)膜RNA用Real Time RT-PCR方法檢測Bcl-2和Bax mRNA的表達(dá)水平，采用Tunel法檢測視網(wǎng)膜各層的細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色結(jié)果顯示:對照組各層結(jié)構(gòu)無異常。模型組8h時(shí)視網(wǎng)膜出現(xiàn)水腫;16h時(shí)水腫加重，出現(xiàn)RGCs數(shù)目減少，INL層變薄;24h時(shí)水腫基本消失，RGCs數(shù)目繼續(xù)減少，INL進(jìn)一步變薄;48h時(shí)視網(wǎng)膜變

4、薄。藥物組8h和16h時(shí)較模型組視網(wǎng)膜組織水腫減輕;16h、24h及48h和模型組相比，RGCs減少較低，視網(wǎng)膜INL厚度改變不明顯。
　　2.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:模型組Bcl-2于4h開始下降，在24h達(dá)到最低值，與對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);藥物組各時(shí)間點(diǎn)均高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F4,8,16,24,48=8.079，9.005，9.904，35.5

5、63，8.810,P＜0.05)。模型組Bax從4h開始上升，24h達(dá)到高峰，與對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;藥物組各時(shí)間點(diǎn)均低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F4，8,16,24,48=16.601，13.525，10.303，25.849，13.805，P＜0.05）。
　　3.Real Time RT-PCR方法結(jié)果顯示:Bcl-2 mRNA在模型組各組均低于對照

6、組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而藥物組各組均高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F4,8,16,24,48=112.934,109.750,3534.800,112.428,128.140,P＜0.05)。Bax mRNA在模型組各組均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而藥物組各組均低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

7、F4，8,16,24,48=74.115，54.504，81.271，243.743，97.163,P＜0.05)。
　　4.Tunel法結(jié)果顯示:模型組細(xì)胞凋亡指數(shù)從4h開始上升，24h達(dá)到高峰，與對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);藥物組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F4,8,16,24,48=87.096,232.245,575.564,389.205,771.65

8、8,P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.本研究采用夾閉頸總動(dòng)脈的方法成功建立大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注模型:模型組Bcl-2的表達(dá)減少，Bax的表達(dá)增加，視網(wǎng)膜厚度出現(xiàn)短暫水腫，RGCs數(shù)目減少，INL變薄，凋亡細(xì)胞數(shù)目增加。
　　2.藥物組與模型組相比較，Bcl-2的表達(dá)增加，Bax的表達(dá)降低，視網(wǎng)膜厚度改變不明顯，RGCs數(shù)目減少較低，凋亡細(xì)胞數(shù)目降低。因此，凋亡基因Bcl-2和Bax的比例變化在視網(wǎng)膜缺血再灌注中對于