Study on the role of polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase 4 in human breast carcinomas-potential implication in tumor-.pdf

1、蛋白質(zhì)糖基化是一種主要的翻譯后修飾，在分化、發(fā)育和許多生物功能中發(fā)揮關(guān)鍵作用。主要分為三種亞型:N-糖基化、O-糖基化和糖胺聚糖。在這幾種亞型中，對(duì)O-N乙酰氨基半乳糖及粘蛋白的糖基化研究較少。O-N乙酰氨基半乳糖被大約20種同工酶所調(diào)控。糖基化的改變可使蛋白調(diào)控?fù)p傷或信號(hào)傳導(dǎo)通路改變，因而與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。基于此，目前的很多研究聚焦于腫瘤相關(guān)聚糖
　　目的:
　　N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶4(GalNAc-T4)參與

2、N-乙酰氨基半乳糖(O-GalNAc)生物合成在乳腺癌調(diào)控中的作用
　　方法:
　　本研究分為三部分:
　　第一部分:臨床分析GALNT4在乳腺腫瘤中的作用
　　在本部分，我們使用了192例不同分級(jí)的乳腺正常、癌旁及癌組織。GALNT4屬于N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶家族中的一員，它在黏蛋白糖基化的最初階段，可催化N-乙酰氨基半乳糖連接到絲/蘇氨酸殘基上，進(jìn)而形成Tn抗原，然后被其他一些糖基轉(zhuǎn)移酶催化延長(zhǎng)。據(jù)報(bào)道:T

3、n抗原在很多腫瘤中過表達(dá)，其關(guān)鍵步驟被分子伴侶COSMC所調(diào)控。因此，在本部分我們分別檢測(cè)分析了了GALNT4、Tn和COSMC在不同乳腺組織中的表達(dá)情況。
　　第二部分:GalNAc-T4在腫瘤相關(guān)抗原調(diào)控中的作用
　　在本部分，我們利用不同類型的乳腺癌細(xì)胞系來(lái)分析了GALNT4的表達(dá)及其生物學(xué)作用。為了分析GALNT4在O-糖基化中的作用，我們下調(diào)了GALNT4基因的表達(dá)，并分析了轉(zhuǎn)移酶的活性
　　第三部分:GAL

4、NT4在雌激素受體ERα轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用
　　通過分析GALNT4在不同乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)，我們發(fā)現(xiàn)GALNT4表達(dá)水平和細(xì)胞的雌激素狀態(tài)可能存在相關(guān)性。為了深入理解GALNT4參與O-糖基化的分子機(jī)制，我們通過RNA干擾的手段下調(diào)GALNT4的表達(dá)，然后檢測(cè)了雌激素受體及其相關(guān)分子的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　免疫組織化學(xué)分析顯示，Tn抗原表達(dá)與乳腺癌分級(jí)有高度相關(guān)性。出乎意料的是:在早期腫瘤中GalNAc-T4和C

5、OSMC均高表達(dá)，但是在高級(jí)別的腫瘤中未見其表達(dá)升高。這提示:Tn抗原表達(dá)的調(diào)控不是由于COSMC表達(dá)降低或突變所致，而可能是因?yàn)镚ALNT4抑制直接影響了Tn抗原表達(dá)。因此，即使COSMC表達(dá)升高，也不能形成核心結(jié)構(gòu)。這就解釋了在高級(jí)別乳腺癌中Tn表達(dá)升高的原因。
　　第二部分結(jié)果顯示，GALNT4表達(dá)與C1galT1和COSMC的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。將GALNT4重新表達(dá)后可導(dǎo)致COSMC表達(dá)下調(diào)。此外，我們還發(fā)現(xiàn)，GALNT4

6、下調(diào)后，T抗原表達(dá)升高，GALNT4營(yíng)救之后，T抗原表達(dá)降低。同時(shí)，GALNT4下調(diào)可促進(jìn)ST6GalNAc-Ⅰ的表達(dá)進(jìn)而提高唾液酸化的Tn抗原表達(dá)。
　　在本部分，我們發(fā)現(xiàn)GALNT4表達(dá)下調(diào)可降低ERα，F(xiàn)OXA1和Cyclin D1的表達(dá)。此外，共沉淀結(jié)果顯示，F(xiàn)OXA1糖基化與GALNT4相關(guān)，GALNT4下調(diào)導(dǎo)致FOXA1下調(diào)，干擾FOXA1和ERα的相互作用。GALNT4重新表達(dá)可恢復(fù)兩者之間的相互作用及FOXA1的糖