C-JNK信號通路對心梗后大鼠心肌鉀通道重構(gòu)的氧化還原調(diào)控機制.pdf

1、目的:在氧化應(yīng)激所致的心肌肥厚及凋亡中，c-JUN氨基末端激酶(JNK)是十分重要的調(diào)節(jié)因子，但其對心肌離子通道重構(gòu)的調(diào)控機制還并不清楚。因此，本研究目的是明確大鼠心梗(MI)6-8周后c-JNK信號通路在電壓門控鉀通道(Kv)重構(gòu)中的作用和內(nèi)在調(diào)控機制。
　　方法:雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠購自河北醫(yī)科大學實驗動物中心。取體重180～200g的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠建立心肌梗死動物模型，于

2、手術(shù)后6-8周，對大鼠腹腔注射超劑量戊巴比妥鈉（100mg/kg）麻醉，摘出心臟，并使用Langendoff法通過冠狀動脈進行膠原酶灌流，獲得單一分離的心室肌細胞，在CO2培養(yǎng)箱中孵育4小時后，對心肌細胞樣本進行全細胞膜片鉗試驗記錄電壓門控鉀通道電流(Ito)和分子生化分析。本研究使用非放射性JNK激酶分析kit(Cell Signaling Technology)進行c-Jun活性測定。
　　結(jié)果:
　　1、使用免疫印跡法

3、顯示心梗后JNK活性顯著升高約1倍，而電壓門控鉀通道電流(Ito)顯著降低(Sham組:28.9±3.1 pA/pF，n=20;MI組:15.2±2.7pA/pF, n=15; P＜0.05);
　　2、心梗后心室肌細胞經(jīng)JNK抑制劑SP60012510 M處理4小時后，Ito電流密度可恢復至對照組水平（SP600125+MI:31.6±3.5 pA/pF，n=11;Sham組:28.9±3.1 pA/pF，n=20;P＜0.05

4、）;且假手術(shù)組經(jīng)SP600125處理后的最大Ito電流強度(27.9±3.6 pA/pF，n=9)和未經(jīng)處理的假手術(shù)組無統(tǒng)計學差異。心梗心肌經(jīng)膜滲透性蛋白抑制劑JNKI-1（10μM）處理后，Ito密度也有顯著增加，而假手術(shù)組經(jīng)相同處理后無改變;
　　3、硫氧還蛋白(Trx)還原酶抑制劑金諾芬(AF)顯著抑制了SP600125對心梗大鼠心肌Ito電流的增大作用(MI+AF+SP600125:15.7±3.3 pA/pF，n=17)

5、，而AF對假手術(shù)組Ito無明顯影響;
　　4、JNK抑制劑SP600125治療后心梗心肌的Kv4.2蛋白表達量顯著增大，盡管未完全回復到假手術(shù)組心肌水平，與先前在心梗心肌所觀察到的Ito電流改變一致。而JNK抑制并沒有明顯改變假手術(shù)組心肌的Kv4.2蛋白表達量。
　　結(jié)論:心梗后心肌鉀通道重構(gòu)是氧化還原敏感的，可能通過持續(xù)性激活c-JNK信號通路促進Ito重構(gòu)。本研究結(jié)果表明，在心梗心肌中，JNK活性顯著增高，降低Kv通道的