阻斷JNK信號通路對大鼠急性肺損傷的影響.pdf

1、急性肺損傷以及急性呼吸窘迫綜合癥(ARDS)是指由嚴重感染、創(chuàng)傷、休克和誤吸等多種原因引起的一組臨床表現(xiàn)為呼吸窘迫和頑固性低氧血癥的綜合征。它往往是多器官功能衰竭的首要表現(xiàn)，即使包括呼吸機在內(nèi)的許多先進支持手段，其死亡率仍高達30％-55％。對ARDS機制的研究表明ARDS的發(fā)生發(fā)展與細胞因子及炎癥介質(zhì)的大量釋放及之后繼發(fā)的瀑布反應有關，是全身炎癥反應綜合征(Systemic inflammatory response syndrome

2、，SIRS)的一部分，能否阻斷細胞因子及炎癥介質(zhì)的合成、釋放或作用是治療ARDS的關鍵，以往研究嘗試用細胞因子抗體、一氧化氮合成酶抑制劑等抑制炎癥反應，但結果表明單純阻斷某種或某類細胞因子或炎性介質(zhì)無法阻斷SIRS的發(fā)生。目前，一些研究發(fā)現(xiàn)：創(chuàng)傷應激后細胞因子及炎癥介質(zhì)的合成具有共同的信號途徑。絲裂原活化蛋白(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)是細胞內(nèi)的一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。MAPKs

3、信號轉導通路存在于大多數(shù)細胞內(nèi)，可將細胞外刺激信號轉導至細胞及其核內(nèi)，它在細胞生物學反應(如細胞增殖、分化、轉化及凋亡等)的過程中具有至關重要的作用。MAPK主要包括JNK，p38，Erk1/2三條通路，通過使c-jun和ATF(activating transcription factor)磷酸化，調(diào)節(jié)核轉錄因子AP-1和NF-kB的激活，啟動一系列與應激相關的炎性介質(zhì)的合成?，F(xiàn)有研究顯示MAPK家族中的JNK信號轉導通路與細胞應激、

4、凋亡以及纖維化密切相關。本研究的目的是觀察阻斷JNK信號通道對ALI/ARDS的影響。
　　 雄性Sprague Dwaley(SD)大鼠36只(從南方醫(yī)科大學動物實驗中心購買)，體重180g-280g。隨機分組：空白對照組(簡稱對照組)、ALI模型組、JNK抑制劑組，每組12只。以10％水合氯醛300mg/Kg腹腔注射麻醉，麻醉后空白組氣管內(nèi)滴入0.5ml0.9％生理鹽水、模型組和實驗組氣管內(nèi)滴入0.5ml LPS(10mg/

5、Kg，溶液體積控制在0.5ml)，實驗組同時給予JNK抑制劑組SP600125 10mg/Kg(0.5ml)尾靜脈注射，其他兩組給與同體積抑制劑溶劑尾靜脈注射。8小時處死大鼠，氣管切開插入塑料導管，結扎左肺，留取肺組織行HE及膠原染色和-80℃冰凍。右肺生理鹽水(3ml)反復注入抽吸2次后回收肺泡灌洗液(BALF)，重復一次，收集肺泡灌洗液(BALF)行炎癥指標監(jiān)測。
　　 1.肺部急性炎癥表現(xiàn)。
　　 1)病理學觀察與

6、急性肺損傷病理評分。
　　 A.肺組織病理改變(HE染色)：
　　 對照組：光鏡下肺泡結構完整，無明顯病變。ALI模型組：光鏡下大量炎癥細胞彌漫性分布，以中性粒細胞為主，肺泡腔內(nèi)及肺間隔較多紅細胞滲出，局部肺泡腔內(nèi)粉紅色纖維蛋白滲出，肺泡間隔明顯增寬，嚴重者失去正常的肺泡結構，肺毛細血管內(nèi)大量紅細胞淤積。局部支氣管粘膜上皮細胞脫落。JNK抑制劑組：整個視野少量中性粒細胞散在分布，肺泡腔及間質(zhì)少許紅細胞滲出，肺泡間隔稍有增

7、寬，局限性肺間隔破壞。毛細血管未見明顯紅細胞淤積。
　　 B.急性肺損傷病理評分：
　　 三組病理評分結果顯示，ALI模型組大鼠肺組織病理評分較對照組大鼠顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(13.42±4.82 vs 3.60±0.55,P=0.001)；JNK抑制劑組與ALI模型組病理評分相比差異有統(tǒng)計學意義(7.00±1.83 vs 13.45±4.82，P=0.001)，JNK抑制劑組與對照組大鼠肺組織病理評分大鼠肺組織評

8、分相比差異沒有統(tǒng)計學意義(3.60±0.55vs7.00±1.80P=0.09)；
　　 2)BALF白細胞計數(shù)。
　　 空白對照組與ALI模型組BALF白細胞分別為87±82.6 vs 255±164.4，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，ALI模型組與JNK抑制劑組BALF白細胞分別為255±164.4 vs 127±44.3,有顯著統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。
　　 3)肺泡灌洗液細胞因子TNF-a。

9、>　　 對照組細胞因子TNF-a與ALI模型組差異有統(tǒng)計學意義(0.9345±0.4389 vs 0.4473±0.2127，P＜0.05)，ALI模型組TNF-a與JNK抑制劑組無統(tǒng)計學差異(0.9409±0.3487 vs 0.9345±0.4389，P＞0.05).
　　 4)冰凍肺組織MPO(髓過氧化物酶)活性測定。
　　 對照組肺組織MPO活性與ALI模型組差異有統(tǒng)計學意義(0.77±0.27 vs 1.26

10、±0.15,P＜0.05)，JNK抑制劑組MPO活性與ALI模型組差異有統(tǒng)計學意義(0.52±0.12 vs 1.26±0.15,P＜0.05)，與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 2.肺組織水腫指標。
　　 肺組織干濕重比：對照組、ALI模型組與JNK抑制劑組三組兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(0.1995±0.0169 vs 0.1767±0.0161 vs 0.1808 vs 0.0184，P＞0.05

11、)。
　　 3.肺纖維化指標.。
　　 1)肺組織膠原定量。
　　 ALI模型組肺組織膠原含量與對照組組相比差異有統(tǒng)計學意義(45.08±5.97 vs 8.65±6.74,P＜0.05)，ALI模型組膠原含量與JNK抑制劑組無差異(52.08±14.06 vs 45.08±5.97，P＞0.05)。
　　 2)肺組織膠原(Masson)染色。
　　 光鏡下對照組肺實質(zhì)和肺間質(zhì)未見膠原沉積；ALI