中國南海PHAKELLIA FUSCA海綿及THEONELLA SWINHOE海綿可培養(yǎng)共生真菌種群多樣性的研究.pdf

1、本研究使用8種真菌分離培養(yǎng)基（馬丁培養(yǎng)基、2216素培養(yǎng)基、高氏一號培養(yǎng)基、麥芽粉培養(yǎng)基、MYPG培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基、沙堡培養(yǎng)基和豆芽汁培養(yǎng)基）對中國南海Phakellia fusca海綿及Theonella swinhoe海綿的共生真菌進行分離培養(yǎng)。根據18S rDNA片段序列信息對來自兩種海綿的共生真菌進行了系統發(fā)育分析。 實驗結果顯示：8種培養(yǎng)基里分菌種類最多的是馬丁培養(yǎng)基（Phakellia fusca、Theonell

2、a swinhoe海綿分別分得12、5類菌），2216素培養(yǎng)基和高氏一號培養(yǎng)基的數量次之（2216素培養(yǎng)基在Phakellia fusca、Theonella swinhoe海綿分別分得5、5類菌，高氏一號培養(yǎng)基在在Phakellia fusca、Theonella swinhoe海綿分別分得7、2類菌），而剩余的麥芽粉、MYPG、察氏、沙堡以及豆芽汁培養(yǎng)基在每種海綿分別分得1-3類菌。根據分離菌株的菌落形態(tài)特征初步得到111株菌，純化

3、培養(yǎng)后提取單菌DNA，并采用真菌18S rDNA片段的特異引物PCR擴增，通過Taq I、Hinf I、Hae III三種限制性內切酶對PCR產物進行ARDRA酶切分型，Phakellia fusca、Theonella swinhoe海綿可培養(yǎng)真菌分別分出5種及4種型，共31株獨立菌。對31株菌的PCR產物測序并BLAST進行在線序列比對，從而得到這些菌株的生物學信息。 31株菌的序列分析顯示，Phakellia fusca海

4、綿可培養(yǎng)共生真菌中所有分離出的真菌屬于子囊菌門中（Ascomycota）9目14屬（外加1個未鑒定到屬）和擔子菌門（Basidiomycota）中1目1屬，Theonella swinhoe海綿可培養(yǎng)共生真菌中所有分離出的真菌屬于子囊菌門中（Ascomycota）3目5屬（外加1個未鑒定到屬）。Phakellia fusca海綿分離出的共生真菌比例最高的目為Eurotiales(n=8,34.8％)（n為分出菌的種類數），比例最高的屬為

5、Aspergillus（n=5,21.7％），Theonella swinhoe海綿分離出的共生真菌優(yōu)勢目為Eurotiales(n=5,62.5％)，比例最高的屬為Aspergillus和Penicillium（均為n=2,25％）。Theonella swinhoe海綿分離出的共生真菌所屬于的3目5屬（外加1個未鑒定到屬）在Phakellia fusca海綿分離出的共生真菌中均能找到。 本研究確定了中國南海Phakellia