水牛卵泡液蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、本試驗以廣西沼澤型水牛卵泡液作為研究對象，采用雙向凝膠電泳技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜分析水牛成熟卵泡液及未成熟卵泡液之間蛋白表達的差異。試驗共分為三個章節(jié):第一章是建立和優(yōu)化水牛卵泡液蛋白質(zhì)的雙向電泳體系，第二章是分離和鑒定水牛成熟卵泡液及未成熟卵泡液之間的差異蛋白質(zhì)，第三章首先去除水牛成熟及未成熟卵泡液高豐度蛋白，然后再進行二者之間差異蛋白質(zhì)的分離及鑒定。
　　 試驗一:通過對蛋白質(zhì)處理方法、IPG膠條的長度及PH值、上樣量等參數(shù)進行比較及

2、優(yōu)化，建立適合于水牛卵泡液蛋白質(zhì)分離的雙向電泳體系。結(jié)果顯示，經(jīng)丙酮沉淀法處理得到的水牛卵泡液總蛋白，在24 cm、PH4～7的IPG膠條且上樣量350μg時可以得到質(zhì)量較好、分辨率較高的雙向電泳圖譜，應用Image Master2D platinum軟件對圖像進行分析檢測，可得到將近280個蛋白質(zhì)點。
　　 試驗二:采用前面建立及優(yōu)化的雙向電泳體系，對水牛成熟及未成熟卵泡液總蛋白質(zhì)進行分離，應用ImageMaster2D pl

3、atinum軟件對二者的凝膠圖譜進行匹配分析，得到光密度值差異倍數(shù)在3倍以上的差異表達蛋白點25個。以成熟卵泡液蛋白質(zhì)作為對照組，其中13個蛋白質(zhì)在未成熟卵泡液中表達上調(diào)，6個蛋白質(zhì)表達下調(diào)，2個蛋白質(zhì)缺失，4個蛋白質(zhì)在未成熟卵泡液中特異性表達。質(zhì)譜最終鑒定出10個蛋白質(zhì):鋅指蛋白674、過氧化物酶-2、溶酶體運輸調(diào)節(jié)因子、驅(qū)動蛋白、醛糖還原酶、牛纖維蛋白原晶體結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白、核苷二磷酸激酶、α-氨基己二酸半醛脫氫酶、抑制素α鏈前

4、體。
　　 試驗三:首先分別對水牛成熟及未成熟的卵泡液樣品進行高豐度蛋白去除試劑盒處理，然后同樣采用試驗一中已經(jīng)建立及優(yōu)化的雙向電泳體系，對經(jīng)過試劑盒處理的水牛成熟及未成熟卵泡液蛋白樣品進行分離鑒定，共篩選出21個差異表達蛋白點，其中10個蛋白質(zhì)在未成熟卵泡液中表達上調(diào)，7個蛋白質(zhì)表達下調(diào)，3個蛋白質(zhì)表達缺失，1個蛋白質(zhì)在水牛未成熟卵泡液中特異性表達。有4個蛋白點被質(zhì)譜成功鑒定出來，對應4種蛋白質(zhì):硫酸化糖蛋白、纖維蛋白原D片段