中國遼寧地區(qū)漢族人群PADI4-94T-C單核苷酸多態(tài)性與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病關(guān)聯(lián)性的研究.pdf

1、前言：
　　類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為特征的慢性全身自身免疫性疾病，病理上具有對稱性、進(jìn)行性及侵蝕性的多關(guān)節(jié)慢性炎癥。雖然類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的確切病因和發(fā)病機制尚不清楚，但一般認(rèn)為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是由多種遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。肽酰精氨酸脫亞胺基酶（Peptidylarginine deiminase，PADI）是精氨酸轉(zhuǎn)化為瓜氨酸過程中的關(guān)鍵酶，瓜氨酸化后的蛋白質(zhì)往往可以

2、改變其分子構(gòu)象，從而改變蛋白質(zhì)的生化活性，進(jìn)而可以參與多種生理和病理反應(yīng)。
　　近些年，許多研究者以不同國家地區(qū)的人群為基礎(chǔ)，圍繞PADI4基因rs2240340多態(tài)性與類風(fēng)關(guān)濕節(jié)炎是否相關(guān)做了大量研究，對二者關(guān)系的認(rèn)識不斷深入，但研究結(jié)果還有一些不明確或不一致的地方，仍需進(jìn)一步探究。為了解中國漢族人群特別是遼寧地區(qū)漢族人群PADI4基因多態(tài)性與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的關(guān)聯(lián)性，本研究以200例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者和200例非類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者為研

3、究對象，進(jìn)行了病例對照研究，將可能影響類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的因素進(jìn)行了單因素分析，確定其危險因素后，進(jìn)一步運用叉生分析，將其分別與PADI4-94基因型進(jìn)行交互作用分析，為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生機制的遺傳基因證據(jù)提供了可能性，也為制定防治措施提供了依據(jù)。
　　對象與方法：
　　一、研究對象的選擇
　　病例組是沈陽市某醫(yī)院的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者200例，均經(jīng)過嚴(yán)格的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，在沈陽市某醫(yī)院體檢中心，連續(xù)收集200例非類風(fēng)

4、濕關(guān)節(jié)炎患者作為對照組，并保證病例組和對照組例數(shù)相等且非匹配設(shè)計，對照組人群均經(jīng)過血清類風(fēng)濕因子(rheumatoid factor，Rf)和抗核抗體(antinudear antibody，ANA)檢測，且結(jié)果均為陰性，并無類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn)，已確定為非類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者。所有研究對象均在遼寧省居住5年以上且無血緣關(guān)系的漢族人群，排除結(jié)締組織病和關(guān)節(jié)性疾病。所有臨床和實驗室資料的收集以及外周血樣的采集均獲得研究對象的知情同意，簽知情同

5、意書。
　　二、調(diào)查內(nèi)容
　　(1)研究對象的年齡、身高、體重、學(xué)歷等一般情況。
　　(2)研究對象是否攝入奶制品、每周吃鈣片的量、是否每周吃豆制品、是否每周吃海產(chǎn)品等飲食狀況，是否飲酒、吸煙等。
　　(3)研究對象是否有肝炎、糖尿病、高血壓、缺血性心臟病、消化道潰瘍，是否有過敏等疾病史。
　　三、診斷標(biāo)準(zhǔn)和測量方法
　　診斷標(biāo)準(zhǔn):所有患者均符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會(American Colleg

6、e ofRheumatology，ACR)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)[5]。診斷標(biāo)準(zhǔn)為:(1)晨僵至少1h（持續(xù)＞6w）;(2)3個或以上關(guān)節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(3)腕、掌指關(guān)節(jié)或近端指間關(guān)節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(4)對稱性關(guān)節(jié)腫（持續(xù)＞6w）;(5)皮下結(jié)節(jié);(6)手X線平片改變;(7)類風(fēng)濕因子滴度＞1∶32。符合上述標(biāo)準(zhǔn)4項及以上即診斷為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。
　　四、實驗室檢查
　　血標(biāo)本采集:所有研究對象均于清晨空腹抽取靜脈血5

7、mL，0.2％ EDTA-Na2抗凝，2℃～8℃保存，72 h內(nèi)提取外周血DNA。
　　DNA的提取:取樣本的全血5 ml，用Qiagen公司的DNA提取試劑盒提取基因組DNA，-70℃凍存待用。
　　-LDR法檢測方法:主要應(yīng)用連接酶檢測反應(yīng)(ligase detection reaction，LDR)技術(shù)。
　　五、統(tǒng)計學(xué)方法
　　用Excel建立數(shù)據(jù)，兩人進(jìn)行數(shù)據(jù)的錄入和核查比對，運用SPSS16.0軟件分

8、析，統(tǒng)計學(xué)上的顯著性水平為α=0.05，根據(jù)不同的情況采用不同的統(tǒng)計方法進(jìn)行描述分析，用Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗群體代表性，不同基因型及等位基因頻率比較均采用x2檢驗，OR值及其95％可信區(qū)間表示。進(jìn)行單因素分析后，再用多因素非條件Logistic回歸分析，環(huán)境因素與基因交互作用的分析運用叉生分析進(jìn)行。
　　結(jié)果：
　　PADI4-94基因位點的等位基因頻率在對照組中的分布符合Hardy-Weinberg平

9、衡(P＞0.05)。PADI4-94基因位點的基因型、等位基因頻率，在病例組與對照組人群中的分布無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本組研究按不同性別分層比較發(fā)現(xiàn)，PADI4-94基因位點在對照組與病例組的男女性間分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。單因素分析結(jié)果顯示，BMI、腹型肥胖、住宅情況、有無取暖、通風(fēng)受冷、飲食是否規(guī)律、食用豆制品、食用海產(chǎn)品、是否得過肝炎和過敏在病例組與對照組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);學(xué)歷、基因型、

10、住宅有無電梯、是否飲用牛奶、是否服用鈣片、是否飲酒、是否吸煙、是否得過糖尿病、是否得過高血壓、是否得過心臟病在病例組與對照組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。多因素非條件Logistic回歸分析顯示，在校正其他因素的影響后，最終進(jìn)入回歸方程的5個影響因素分別為BMI、腹型肥胖、住宅情況、取暖、通風(fēng)受冷(P＜0.05)。PADI4-94基因位點的基因型分別與BMI、腹型肥胖、通風(fēng)受冷進(jìn)行交叉分析顯示均有交互作用。
　　討論：<

11、br>　　一、PADI4-94基因易感性分析
　　比較兩組等位基因頻率對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎易感性的影響無統(tǒng)計學(xué)意義;比較兩組的該位點基因型對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的危險性沒有統(tǒng)計學(xué)意義，顯示含有TC和CC的個體患類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的易感性未見升高，表明PADI4-94基因與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病沒有關(guān)聯(lián)。
　　二、危險因素和PADI4基因型在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生中的交互作用
　　本次研究超重組和肥胖組為一個因素，研究結(jié)果表明其超重和肥胖是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

12、發(fā)病的重要危險因素，同時腹型肥胖也是危險因素。出現(xiàn)協(xié)同作用，可能是因為脂肪細(xì)胞作為一種內(nèi)分泌細(xì)胞可以分泌出多種脂肪因子，這種因子可能易發(fā)炎癥反應(yīng)，一旦發(fā)生炎癥反應(yīng)，就可以導(dǎo)致含PADI4細(xì)胞死亡，細(xì)胞內(nèi)的鈣濃度達(dá)到一定的濃度，就可以活化PADI4，進(jìn)而瓜氨酸化，瓜氨酸化后的蛋白質(zhì)往往可以改變其分子構(gòu)象，從而改變蛋白質(zhì)的生化活性，進(jìn)而可以參與多種生理和病理反應(yīng)。肥胖人群有較多脂肪細(xì)胞，更能促使類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。
　　本次研究顯示通

13、風(fēng)受冷是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病的危險因素，通風(fēng)則容易受冷，受冷的人群可能發(fā)生類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎危險性比正常人高?？赡苁且驗楹渥鳛榇碳ひ蜃?，迫使人體的免疫系統(tǒng)做出相應(yīng)調(diào)節(jié)抵制該刺激，免疫系統(tǒng)容易被破壞，也容易促發(fā)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生。在相加效應(yīng)模型中，呈現(xiàn)協(xié)同作用，寒冷是不良的環(huán)境因素，降低人體免疫力，容易誘發(fā)一些致病因子，導(dǎo)致類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。
　　結(jié)論：
　　1.提示PADI4-94T/C位點基因多態(tài)性與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)病可能無關(guān)聯(lián)性。