不同類型紅斑狼瘡患者血清中細(xì)胞因子的表達(dá)模式及意義.pdf

1、目的：LE（lupus erythematous，紅斑狼瘡）是一種典型的自身免疫性疾病，其中70-85％的患者具有皮膚癥狀。根據(jù)臨床表現(xiàn)（特別是皮膚表現(xiàn)）和實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)，分為SLE（systemic lupus erythematous，系統(tǒng)性紅斑狼瘡）和CLE(cutaneous lupuserythematosus，皮膚型紅斑狼瘡)。SLE免疫異常表型十分復(fù)雜，但不可否認(rèn)，各種因素導(dǎo)致的多種免疫細(xì)胞免疫調(diào)控異常均可共同誘導(dǎo)自身免疫

2、性炎癥反應(yīng)的形成，并成為導(dǎo)致器官損害的基礎(chǔ)。CLE發(fā)病同樣受多種致病因素影響，目前認(rèn)為紫外線、角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡、B細(xì)胞高反應(yīng)、T細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞活化及其相互作用構(gòu)成CLE發(fā)病的主要機(jī)制，這些免疫細(xì)胞通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子、自身抗體等直接或間接作用于靶組織并最終導(dǎo)致?lián)p傷。細(xì)胞因子是SLE和CLE中免疫細(xì)胞介導(dǎo)炎癥的重要介質(zhì)，參與了免疫過(guò)程各個(gè)環(huán)節(jié)，是免疫細(xì)胞發(fā)揮功能的重要效應(yīng)物質(zhì)，在炎癥形成過(guò)程中占有十分重要的地位，不同類型的LE可能具有不

3、同的細(xì)胞因子參與。除B細(xì)胞、T細(xì)胞及中性粒細(xì)胞外，Mo/Mφ(monocytes/macrophages，單核-巨噬細(xì)胞)也是多種細(xì)胞因子的重要來(lái)源，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)Mo/Mφ活化與LE發(fā)病密切相關(guān)，但Mo/Mφ在LE中的病理機(jī)制仍不清楚。為了進(jìn)一步明確何種免疫因素在紅斑狼瘡的發(fā)病過(guò)程中起主導(dǎo)作用以及不同類型的紅斑狼瘡的免疫狀態(tài)有何區(qū)別，探討紅斑狼瘡的發(fā)病機(jī)制，尋找診斷與治療的靶點(diǎn)，需要對(duì)不同類型紅斑狼瘡體內(nèi)細(xì)胞因子表達(dá)模式進(jìn)行評(píng)估并分析

4、致病因子與臨床的關(guān)聯(lián)性。
　　方法：我們的研究選取了20個(gè)來(lái)源于B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞以及Mo/Mψ的細(xì)胞因子，共納入96例患者(15例DLE，34例SCLE，47例SLE)，24例正常獻(xiàn)血員為研究對(duì)象，采用回顧性方法收集臨床資料。利用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)半定量測(cè)定血清中相關(guān)的細(xì)胞因子，并采用ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay，酶聯(lián)免疫法)對(duì)顯著升高的有意義因子進(jìn)行定量驗(yàn)證，同時(shí)通過(guò)蛋白質(zhì)相互

5、作用數(shù)據(jù)庫(kù)分析細(xì)胞因子之間的相互作用，采用SPSS17.0比較上述因子在血清中的表達(dá)水平在四組間的差異，分析有意義因子與常規(guī)臨床檢測(cè)指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果:1.蛋白質(zhì)芯片與ELISA兩種檢測(cè)方法所得檢測(cè)值具有極顯著相關(guān)性:IL18(R=0.702,p=0.000); MIF(R=0.522,p=0.000); MIP1α(macrophage inflammatoryprotein-1α，巨噬細(xì)胞炎癥因子1α)(R=0.824，

6、p=0.000)。
　　2.不同臨床類型的紅斑狼瘡具有不同的細(xì)胞因子表達(dá)模式:與正常對(duì)照相比，紅斑狼瘡患者血清中部分細(xì)胞因子顯著升高，不同臨床類型的紅斑狼瘡具有不同的細(xì)胞因子表達(dá)模式，分別為:DLE患者血清中IL-18(p=0.005)，MIF(p=0.000)，IL-17(p=0.000)表達(dá)水平較正常對(duì)照顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SCLE患者血清中IL-6(p=0.004)，IL-10(p=0.000),IL-18(p=0

7、.000),MIF(p=0.000), IL-17(p=0.000), IL-23p19(p=0.001),TNF-a(p=0.006)表達(dá)水平較正常對(duì)照顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;SLE患者血清中IL-6(p=0.006), IL-10(p=0.000), IL-18(p=0.000), IL-17(p=0.000), TNFα(p=0.006),MIF(p=0.000), MIP-1α(p=0.000), IL-23p19(0.0

8、00), IFN-γ(p=0.003), MDC(p=0.008),IFN-α(p=0.020)表達(dá)水平較正常對(duì)照顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.不同類型紅斑狼瘡其炎癥因子水平有差異:通過(guò)分析疾病組中較正常對(duì)照顯著升高的因子發(fā)現(xiàn)IL-6(p=0.047)、IL-18(p=0.002)、MIF(p=0.002)、MIP-1α(p=0.026)在DLE、SCLE、SLE三組間表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.IL-17在

9、各型LE中均顯著高表達(dá)，其中SLE與SCLE中IL-17表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但均顯著高于DLE，表明IL-17不同程度地參與了不同類型LE炎癥形成，其表達(dá)水平在DLE與SCLE中差異顯著，我們推測(cè)IL-17可能成為皮膚型紅斑狼瘡的分型指標(biāo)，Th17細(xì)胞可能對(duì)DLE向SLE的轉(zhuǎn)化產(chǎn)生促進(jìn)作用。
　　5.ELISA方法進(jìn)一步證實(shí)Mo/Mφ相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)存在差別:通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)發(fā)現(xiàn): MIF(p=0.001)、IL18(p=0

10、.005)、MIP1-a(p=0.005)在DLE、SCLE、SLE組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表現(xiàn)為SLE組細(xì)胞因子表達(dá)具水平較SCLE及DLE更高。其中，DLE與SCLE相比較， MIF(p=0.811)、MIP1-a(p=0.991)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　炎癥因子表達(dá)與臨床相關(guān)性分析:IL-18及MIF表達(dá)水平在經(jīng)激素治療大于3個(gè)月的SLE患者血清中均明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意（P＜0.001）;SLE患者24h尿蛋白量越高，

11、其血清中IL-18的含量越高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;患者SLEDAI（systemic lupus erythematosus disease activity index，系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動(dòng)度評(píng)分）及ANA滴度越高，其血清中IL-18的水平越高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P≤0.05);IL-18血清水平與C3量呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.375，p=0.024)，IL-18血清水平與激素治療劑量呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系（r=-

12、0.465，p=0.002）。
　　結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)不同類型的紅斑狼瘡具有不同的細(xì)胞因子表達(dá)模式，炎癥反應(yīng)程度按照DLE、SCLE、SLE的順序呈遞進(jìn)關(guān)系;所檢測(cè)20個(gè)細(xì)胞因子中IL-6、IL-18、MIF、MIP-1α顯著地參與了紅斑狼瘡的發(fā)病，其中IL-18、MIF同時(shí)參與了DLE、SCLE、SLE三者的發(fā)病過(guò)程，MIP-1α相對(duì)獨(dú)立地參與SLE的疾病過(guò)程;IL-17不同程度地參與了不同類型LE炎癥形成，其表達(dá)水平在DLE與S