系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者干細(xì)胞因子及其受體的意義研究.pdf

1、研究目的: 通過(guò)檢測(cè)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清干細(xì)胞因子(SCF)及外周血單個(gè)核細(xì)胞c-kit水平，并與正常對(duì)照組比較，研究SCF及其受體c-kit在SLE患者中是否存在異常，這種異常是否與SLE疾病活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)、貧血程度等相關(guān)，并探討SCF/c-kit在SLE發(fā)病機(jī)制中可能的作用。 研究背景: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)是一種常見(jiàn)的自身免

2、疫性疾病，其疾病特點(diǎn)是機(jī)體免疫系統(tǒng)平衡失調(diào)后對(duì)自身抗原發(fā)生免疫反應(yīng)，并造成多系統(tǒng)的組織損傷。 以往已有國(guó)內(nèi)外專(zhuān)家學(xué)者針對(duì)SLE的免疫學(xué)異常，研究了TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12等細(xì)胞因子與SLE的關(guān)系<'[1,2,3,4]>。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)以前的研究較少涉及的SCF及其受體進(jìn)行研究，探討SCF/c-kit在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中的表達(dá)與正常人群的差異，及其與SLE的臨床表現(xiàn)的相關(guān)性。

3、 干細(xì)胞因子(SCF)是由骨髓微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的多種調(diào)節(jié)因子中重要的一員。c-kit作為SCF的受體廣泛存在于體內(nèi)多種細(xì)胞膜中，包括外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)、肥大細(xì)胞、肝細(xì)胞等。c-kit蛋白的變化影響著SCF與其結(jié)合水平及細(xì)胞功能。SCF與c-kit受體結(jié)合，引起受體的二聚體化及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，在造血、免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要功能。SCF及其受體結(jié)合后除調(diào)控造血干/祖細(xì)胞增生、分化、自我更新外，還可作用于淋巴細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)

4、、肥大細(xì)胞等<'[5]>。SCF及其受體結(jié)合后可能通過(guò)直接刺激淋巴細(xì)胞增生、刺激DC對(duì)淋巴細(xì)胞的激活及促進(jìn)肥大細(xì)胞參與器官纖維化的形成等環(huán)節(jié)，而直接或間接的參與了SLE疾病的發(fā)生、發(fā)展<'[6,7]>。對(duì)于SLE患者的SCF及其受體c-kit蛋白的研究目前國(guó)內(nèi)外僅有個(gè)別報(bào)道。國(guó)內(nèi)綜合研究SCF及其受體c-kit蛋白兩者在SLE患者外周血中的表達(dá)及與臨床的關(guān)聯(lián)和分析尚未見(jiàn)報(bào)道。本課題計(jì)劃用ELISA法檢測(cè)SLE患者血清的SCF，同時(shí)以流式

5、細(xì)胞儀來(lái)檢測(cè)SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的c-kit蛋白的表達(dá)率，結(jié)合上述兩組數(shù)據(jù)和患者臨床表現(xiàn)，綜合分析SCF及其受體的水平與病情嚴(yán)重程度(SLEDAI)及Hb、補(bǔ)體、血沉等的相關(guān)性。 材料與方法: 1．研究對(duì)象及分組 選擇我院門(mén)診及住院的SLE確診患者，分為SLE活動(dòng)組、SLE非活動(dòng)組；并以志愿獻(xiàn)血的健康人作為對(duì)照組。所有SLE患者均符合美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ARA)1982年修訂的SLE診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有SLE患者的疾

6、病活動(dòng)性按Bomberdier等<'[8]>制定的SLE活動(dòng)指數(shù)(SLEDAI)判斷，活動(dòng)期(SLEDAI≥8分)，非活動(dòng)期(SLEDAI<8分)<'[9]>。 2．實(shí)驗(yàn)方法 (1) 取符合條件的患者及健康獻(xiàn)血者外周靜脈血3ml，于6小時(shí)內(nèi)分離血清，-20℃凍存待用。用雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測(cè)上述血清的SCF水平。 (2) 取肝素抗凝靜脈血2ml，離心分離單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)外

7、周血PBMC的c-kit受體蛋白表達(dá)率。 (3) 同時(shí)測(cè)定SLE患者的血沉、補(bǔ)體C<,3>、Hb等。 3．統(tǒng)計(jì)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以Means±SD表示，組間均值比較采用t檢驗(yàn)，兩組間關(guān)系采用相關(guān)分析。以上均采用SPSS 12統(tǒng)計(jì)軟件包完成。 結(jié)果: 1．SLE非活動(dòng)組患者血清SCF水平顯著高于正常對(duì)照組并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；SLE活動(dòng)組SCF水平升高更明顯，與SLE非活動(dòng)組、正常對(duì)照組比較均

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 2．SLE活動(dòng)組外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的c-kit受體蛋白表達(dá)率顯著高于SLE非活動(dòng)組及正常對(duì)照組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)；但SLE非活動(dòng)組與正常對(duì)照組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.43)。 3．SLE患者中血清SCF水平與SLEDAI呈正相關(guān)(r=0.29，P<0.05)，與血沉呈正相關(guān)(r=0.53，P<0.05)，與C<,3>呈負(fù)相關(guān)(r=-0.45，P<0.05

9、)； SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的c-kit受體蛋白表達(dá)率與SLEDAI呈正相關(guān)(r=0.81，P<0.05)，與血沉無(wú)明顯相關(guān)相關(guān)(P=0.17)，與C<,3>呈負(fù)相關(guān)(r=-0.33，P<0.05)。 4．活動(dòng)期SLE組血清SCF及PBMC c-kit水平與血紅蛋白濃度均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.39，P<0.05/r=-0.48，P<0.05)。 結(jié)論: 1．SLE患者血清SCF處于高水平，且其水平與SLEDAI