煉蜜炮制機(jī)理研究：美拉德反應(yīng)對(duì)煉蜜炮制及其生物活性的影響.pdf

1、蜂蜜既是食品又是藥品，同時(shí)還是中藥炮制和中藥制劑的常用輔料，在作為輔料使用時(shí)，通常需要加工成煉蜜。經(jīng)過煉制，煉蜜的粘度提高，在制劑中發(fā)揮粘合劑的作用。但是，在中藥炮制過程中，需要用水將煉蜜稀釋，然后與飲片拌勻，再炒干，因此難以用粘度提高解釋其炮制機(jī)理。
　　前人研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過煉制，蜂蜜中的羥甲基糠醛(HMF)含量大幅度增加，結(jié)合煉蜜顏色加深的特點(diǎn)，本文推測其中發(fā)生了美拉德反應(yīng)和焦糖化反應(yīng)，其反應(yīng)產(chǎn)物可能具有增強(qiáng)飲片或制劑生物活性的

2、作用。為了驗(yàn)證這一假說，本研究(1)評(píng)價(jià)了葡萄糖、果糖和HMF單獨(dú)加熱反應(yīng)以及與不同氨基酸一起加熱反應(yīng)后，產(chǎn)物的理化性質(zhì)和抗氧化活性;(2)制備了煉蜜(R-h)、谷氨酸鈉煉蜜(GR-h)（添加谷氨酸鈉煉蜜以促進(jìn)美拉德反應(yīng)）、發(fā)酵谷氨酸鈉煉蜜(FGR-h)（將谷氨酸鈉煉蜜用酵母菌發(fā)酵以降解糖和HMF），然后對(duì)比了其理化性質(zhì)和體內(nèi)外生物活性。主要結(jié)果如下：
　　1.熱處理對(duì)果糖、葡萄糖和HMF的影響:果糖和葡萄糖(500mg/mL)分

3、別于pH4.0，100℃條件下加熱，反應(yīng)液褐變吸收(A420)、HMF含量及DPPH自由基清除活性均隨著反應(yīng)時(shí)間逐漸提高。反應(yīng)72h后，果糖體系的A420、HMF含量以及DPPH自由基清除活性分別比葡萄糖體系高9.09、17.38和0.81倍。果糖和葡萄糖分別與19種不同的氨基酸（摩爾濃度比為50∶1）反應(yīng)12h后，反應(yīng)液A420分別增加0.09～2.27倍和0.68～30.43倍;大部分氨基酸對(duì)果糖反應(yīng)液的HMF含量及DPPH自由基清

4、除活性影響不大（除半胱氨酸、脯氨酸和色氨酸外），但是對(duì)葡萄糖反應(yīng)液影響較大（除半胱氨酸外），葡萄糖體系HMF含量及DPPH自由基清除活性比不添加氨基酸時(shí)分別提高0.32～16.13倍和0.45～1.31倍。HMF單獨(dú)于pH4.0，100℃條件下加熱反應(yīng)12h后反應(yīng)液A420及DPPH清除活性較未加熱時(shí)分別提高10.90倍和6.24倍，除色氨酸外，與18種不同氨基酸加熱反應(yīng)后，HMF反應(yīng)液的A420及DPPH清除活性均進(jìn)一步顯著提高。

5、r>　　2.添加氨基酸鹽及酵母菌發(fā)酵對(duì)煉蜜的影響:采用添加谷氨酸鈉的方法在120℃下煉蜜2h，根據(jù)Lab色彩模型分析L、a、b三者的數(shù)值發(fā)現(xiàn)GR-h的顏色較生蜜(H)和R-h明顯加深;H中HMF含量僅為0.084mg/g; R-h的HMF含量顯著增加，達(dá)1.124mg/g; GR-h的HMF含量較R-h僅增加了25％;R-h的DPPH清除活性及總抗氧化能力比H分別提高了6.32和2.97倍，而GR-h的DPPH清除活性及總抗氧化能力與R

6、-h相比又分別提高了2.30和2.66倍。在H與兩種煉蜜中，H的糖含量最高，為794.500mg/g;煉制使糖含量小幅下降。GR-h經(jīng)酵母菌發(fā)酵后，糖及HMF大部分降解，分別由530.180和1.408mg/g下降至98.160和0.335mg/g，但是體系顏色和抗氧化活性幾乎沒有變化。
　　3.不同煉蜜樣品對(duì)化療副作用的預(yù)防作用:用化療藥MTX（5mg/kg體重）誘導(dǎo)小鼠腸道黏膜炎。以GSH（0.13g/kg體重）為陽性對(duì)照，給

7、藥組分別給與H、R-h、GR-h及FGR-h（2.6g/kg體重）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除R-h外，其他治療組小鼠的體重、食量、白細(xì)胞下降情況、曠場實(shí)驗(yàn)活動(dòng)能力、脾臟指數(shù)下降程度及十二指腸組織形態(tài)均比MTX模型組小鼠有所改善，其中FGR-h的改善效果最好。從生化指標(biāo)看，MTX組小鼠空腸的MPO及iNOS活性較正常對(duì)照組(NC)明顯提高(p＜0.001，p＜0.001)，MDA及蛋白質(zhì)羰基含量顯著增加(p＜0.001，p＜0.001);而各給藥組均

8、使兩種酶的活性及MDA、蛋白質(zhì)羰基含量顯著下降，四個(gè)生化指標(biāo)的測定結(jié)果顯示FGR-h組治療效果最為顯著（顯著性均為p＜0.001）。
　　4.不同煉蜜樣品對(duì)白血病細(xì)胞株K562增殖的影響:以MTT法檢測不同濃度的MTX單獨(dú)應(yīng)用及與H和不同的煉蜜聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人白血病細(xì)胞K562增殖的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著MTX濃度的增大，細(xì)胞增殖抑制率逐漸升高;與MTX(0.05μmol/L)單獨(dú)應(yīng)用時(shí)相比，0.5mg/mL的GR-h或FGR-h與0.0