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文檔簡介
1、目的:應用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用平臺,研究不同HBV DNA載量的慢性乙型肝炎患者的小分子代謝化合物的差異,為慢性乙型肝炎的臨床診斷、療效監(jiān)測、預后評估和長期隨訪提供新的血清學指標,進一步探索這些差異與乙型肝炎發(fā)病機制的關(guān)系。
材料和方法:所有研究對象均滿足2015年中華醫(yī)學會感染病學和中華醫(yī)學會肝病學分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南》中該病的診斷標準,并滿足本研究的其它納入標準和排除標準。利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)平
2、臺的技術(shù),在正、負離子模式下檢測慢性乙型肝炎人群中HBV DNA陽性組(25例)和HBV DNA陰性組(10例)兩組血清的代謝化合物。質(zhì)譜采集的原始數(shù)據(jù)通過SIEVE V2.1軟件進行濾噪、重疊峰解析、峰對齊、峰匹配、標準化和歸一化等處理。分別輸出正、負離子峰表,保存為Excel表,采用80%規(guī)則,處理缺失值。將處理缺失值后的Excel數(shù)據(jù)導入SIMCA—P13.0軟件中,采用偏最小二乘法—判別分析方法進行模式識別分析。觀察模型中樣本的
3、分布情況及其可靠性和預測能力,計算偏最小二乘法模型中各變量的變量投射重要性值,同時結(jié)合得分圖、載荷圖和非參數(shù)檢驗,篩選出潛在的生物標志物。再根據(jù)質(zhì)荷比和保留時間查找數(shù)據(jù)庫等進行比對和篩選,確認該物質(zhì)。用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計分析。
結(jié)果:經(jīng)過兩獨立樣本t檢驗,結(jié)果表明HBV DNA陽性組和HBV DNA陰性組的年齡分布沒有統(tǒng)計學差異,P=0.942(39.64±11.09,43.60±11.49)。經(jīng)過Fisher'sE
4、xact Test,P=0.258,我們可以認為兩組的性別構(gòu)成比沒有差異。進一步比較2組患者的肝臟功能情況,結(jié)果顯示,在谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和Y-谷氨?;D(zhuǎn)移酶水平上,HBV DNA陽性組的值顯著高于HBV DNA陰性組(P=0.010,P=0.003和 P=0.009);然而,在白蛋白、球蛋白、總膽紅素、堿性磷酸酶和膽堿酯酶的水平方面,兩組患者的值是相似的。通過超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)初步鑒定出336種小分子代謝化合物,其中在負
5、離子模式下鑒定出151個代謝化合物,在正離子模式下鑒定出185個代謝化合物,最后只篩選出2種有差異的代謝化合物。本研究成功構(gòu)建了HBV DNA陽性組和HBV DNA陰性組偏最小二乘法代謝譜圖分析模型((R2=0.00,0.666),Q2=(0.00,-0.201)),在負離子模式條件下,篩選出了1種有差異的代謝化合物是異檸檬酸,該物質(zhì)在HBV DNA陰性組中的含量明顯高于HBVDNA陽性組的患者(P=0.019);在正離子模式條件下,篩
6、選出了溶血磷脂酰乙醇胺(22∶4),該物質(zhì)在HBV DNA陽性組中的含量明顯高于HBV DNA陰性組的患者,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.032)。
結(jié)論:1.基于超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)和偏最小二乘法一判別分析模型,可能為評估慢性乙型肝炎患者不同HBV DNA載量提供了一種的新方法。
2.利用代謝組學的技術(shù)篩選出的差異性代謝物:異檸檬酸和溶血磷脂酰乙醇胺(22∶4)可以作為區(qū)分HBV DNA陽性組和陰性組的潛在生物
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