基于高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時測定復(fù)方中藥多個指標(biāo)成分的研究.pdf

1、本學(xué)位論文采用液相色譜-離子阱質(zhì)譜法從治療艾滋病復(fù)方中藥新藥艾可清2號膠囊中鑒定了10種烏頭堿類生物堿，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了治療艾滋病復(fù)方中藥新藥艾可清2號膠囊中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿的同時測定方法。同時完成了對某中藥保健食品中非法添加降血糖化學(xué)藥物的定性定量檢測方法研究。
　?。ㄒ唬┌汕?號膠囊中6種烏頭堿類生物的含量測定
　　目的:
　　1.應(yīng)用高效液

2、相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MSn)技術(shù)研究艾可清2號膠囊中烏頭堿類生物堿的種類。
　　2.研究艾可清2號膠囊中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿的高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)含量測定方法。
　　方法:
　　1.應(yīng)用高效液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MSn)技術(shù)對艾可清2號膠囊中的烏頭堿類生物堿進行定性分析，樣品經(jīng)1％甲酸-乙腈溶解，5％氫氧

3、化鈉堿化，乙醚萃取等步驟處理;采用WatersSymmetry(@) C18色譜柱(4.6 mm×150mm，5μm)，水(5mmol·L-1甲酸銨和0.2％甲酸水溶液)乙腈為流動相進行梯度洗脫，流速0.6mL·min-1，在電噴霧正離子模式下，以全掃描方式及自動二級質(zhì)譜方式采集數(shù)據(jù)，進行質(zhì)譜分析。
　　2.采用高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)法，對艾可清2號膠囊中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、

4、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿等6種成分進行含量測定，樣品經(jīng)1％甲酸-乙腈超聲處理;采用Agilent Poroshell120EC-C18色譜柱(2.1mm×100mm，2.7μm)色譜柱，以水（10mmol·L-1甲酸銨和0.2％甲酸水溶液）-乙腈為流動相進行梯度洗脫，流速0.3mL·min-1，在電噴霧正離子模式下，以多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)方式采集數(shù)據(jù)進行質(zhì)譜分析，定性、定量離子對為m/z646.3→368.1/568.1（烏頭堿）

5、、m/z616.0→524.0/556.2（次烏頭堿）、m/z632.2→104.8/572.0（新烏頭堿）、m/z604.2→554.2/104.8（苯甲酰烏頭堿）、m/z574.1→104.9/542.1（苯甲酰次烏頭堿）、m/z590.1→540.1/104.9（苯甲酰新烏頭堿）。
　　結(jié)果:
　　1.采用高效液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MSn)技術(shù)，在全掃描模式及自動二級質(zhì)譜模式下，獲得各成分一級質(zhì)譜信息及二

6、級質(zhì)譜裂解信息，通過分析質(zhì)譜數(shù)據(jù)，并結(jié)合文獻鑒定艾可清2號膠囊中的烏頭堿類生物堿的種類。初步鑒定了尼奧靈、附子靈、塔拉地撒敏、查斯曼寧，烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿等10種成分。
　　2.采用高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)法，在多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式下，同時測定了艾可清2號膠囊中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿等6種成分

7、，并進行方法學(xué)驗證。烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿濃度分別在0.5～500.0ng·mL-1(r=0.9999)、0.5～500.0 ng·mL-1(r=0.9996)、0.5～500.0 ng·mL-1(r=0.9993)、100.0～500.0 ng·mL-1(r=0.9994)、500.0～1000.0 ng·mL-1(r=0.9995)和500.0～1000.0 ng·mL-1(r=0.

8、9994)范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均回收率(n=9)分別為104.29％、99.87％、96.81％、98.74％、98.77％和96.20％。
　　結(jié)論:
　　1.應(yīng)用高效液相色譜-離子阱質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC-MSn)技術(shù)鑒定了艾可清2號膠囊中的10種烏頭堿類生物堿。
　　2.建立了艾可清2號膠囊中烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿的高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜(HPLC-MS/

9、MS)含量測定方法。
　?。ǘδ持兴幈＝∈称分蟹欠ㄌ砑拥慕笛腔瘜W(xué)藥物的檢測
　　目的:
　　研究某中藥保健食品中非法添加的二甲雙胍、苯乙雙胍、羅格列酮、格列苯脲的高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)含量測定方法。
　　方法:
　　采用高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜(HPLC-MS/MS))法，在多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式下，同時測定了某中藥保健食品中非法添加的二甲雙胍、苯乙雙胍、羅

10、格列酮、格列苯脲等四種成分，并進行方法學(xué)驗證。
　　結(jié)果:
　　采用高效液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)法，在多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式下，同時測定某中藥保健食品中非法添加的二甲雙胍、苯乙雙胍、羅格列酮、格列苯脲等四種成分，采用Thermo BDS Hypersil C8（2.1mm×100mm，2.4μm）色譜柱，以0.2％甲酸水溶液(A)和乙腈-甲醇(6∶4，v/v)(B)為流動相進行梯度洗脫，流速0.

11、3mL·min-1，在電噴霧正離子模式下，以多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式測定，定量離子對為m/z129.9→70.9（二甲雙胍）、m/z205.9→59.9（苯乙雙胍）、m/z357.9→134.9（羅格列酮）、m/z494.0→169.0（格列苯脲）。同時檢出了4種降血糖化學(xué)藥物。檢出限為0.06～0.5ng·mL-1，定量限為0.21～1.62ng·mL-1，在3個不同濃度的添加水平下，4種化學(xué)藥物的平均回收率為66.3％～110.2％