Mfn2在燈盞花素抗大鼠肝缺血再灌注損傷中的作用.pdf

1、目的:建立大鼠肝臟部分缺血再灌注模型，觀察燈盞花素預(yù)處理減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷的作用，從分子水平和超微結(jié)構(gòu)上研究肝臟缺血再灌注損傷和Mfn2表達(dá)及線粒體超微結(jié)構(gòu)變化的關(guān)系，并探討其可能的機(jī)制，為臨床肝臟外科手術(shù)后肝臟缺血再灌注損傷的防護(hù)提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　采用隨機(jī)數(shù)字表法將40只雄性SD大鼠分為5組，分別為假手術(shù)組（Sham組），對(duì)照組（I/R+NS1、I/R+NS2組）和實(shí)驗(yàn)組（I/R+BS1、I/R+BS

2、2組），1組、2組缺血時(shí)間分別為20min，60min，再灌注時(shí)間為6h。假手術(shù)組、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組術(shù)前分別每天一次腹腔注射生理鹽水2ml、生理鹽水2ml、5mg/kg燈盞花素粉針劑溶解液2ml，共7天。動(dòng)物模型為經(jīng)典肝臟缺血再灌注模型，分別在各組大鼠肝臟門靜脈復(fù)流后6h取肝臟標(biāo)本及靜脈血。檢測(cè)血清ALT、AST含量；比色法檢測(cè)肝組織中MDA含量、SOD活性；觀察肝組織大體形態(tài)學(xué)和顯微病理形態(tài)學(xué)改變；透射電鏡觀察肝細(xì)胞線粒體形態(tài)改變；實(shí)時(shí)

3、定量PCR檢測(cè)肝組織Mfn2 mRNA表達(dá)；Western blot檢測(cè)肝組織Mfn2蛋白的含量。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠肝臟缺血20、60min恢復(fù)再灌注6h后，對(duì)照組ALT、AST水平較假手術(shù)組升高，以I/R+NS2組升高最明顯（P<0.01）；實(shí)驗(yàn)組ALT、AST水平較對(duì)照組降低（P<0.05）。
　　2.相比于假手術(shù)組，對(duì)照組MDA的含量升高，SOD的活性降低，以I/R+NS2組的改變最明顯（P<0.01）；

4、相比于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組MDA的含量明顯降低，SOD的活性明顯增加（P<0.01）。
　　3.對(duì)照組肝臟折光性下降，彌漫性小葉灌注不良，出現(xiàn)局部壞死小葉組織，肝細(xì)胞廣泛水腫，部分呈空泡變性，肝細(xì)胞索絮亂，伴大量炎性細(xì)胞侵潤(rùn)；實(shí)驗(yàn)組的肝細(xì)胞損傷程度較對(duì)照組明顯減輕，伴有少量中性粒細(xì)胞侵潤(rùn)。
　　4.對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞線粒體腫脹，甚至呈空泡狀，線粒體數(shù)量明顯減少，線粒體嵴減少、變短而絮亂，線粒體膜不完整，基質(zhì)密度降低，以I/R+NS2

5、組最為嚴(yán)重；實(shí)驗(yàn)組大鼠肝細(xì)胞線粒體腫脹不明顯，形態(tài)較為一致，線粒體嵴比較規(guī)則，呈板層狀，線粒體膜大部分完整，基質(zhì)未見明顯凝聚。
　　5.對(duì)照組較假手術(shù)組Mfn2蛋白及mRNA表達(dá)量降低（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組Mfn2蛋白及mRNA表達(dá)較相應(yīng)的對(duì)照組均有升高（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1．燈盞花素對(duì)肝臟缺血再灌注中肝組織及線粒體的形態(tài)和功能有一定保護(hù)作用。
　　2．燈盞花素可促進(jìn)Mfn2 mRNA及蛋白的表