燈盞花素脂質(zhì)體前體抗腦缺血再灌注損傷藥效學(xué)研究.pdf

1、缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)損傷是指各種原因造成的局部組織器官的缺血缺氧，使組織細(xì)胞發(fā)生缺血性損傷，在一定條件下恢復(fù)血液再灌注后，細(xì)胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞反而加重的現(xiàn)象。缺血再灌注可挽救瀕臨死亡的細(xì)胞，也可加重細(xì)胞損傷，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。缺血性腦血管病已經(jīng)成為人類(lèi)致死、致殘的最主要疾病之一。 燈盞花素(breviscapine)是從菊科短亭飛蓬屬植物短亭飛蓬(Erigeron breviscapus

2、 Vant．)中提取出來(lái)的黃酮類(lèi)有效成份，是燈盞乙素為主和少量甲素的混合物，其中燈盞乙素含量占95％以上。燈盞花素藥理活性廣泛，具有保護(hù)腦缺血區(qū)神經(jīng)元，拮抗氧自由基，減輕腦水腫和炎癥反應(yīng)，減少腦組織缺血及再灌注損害，保護(hù)腦組織作用。但是其口服生物利用度低。臨床上主要用于治療腦梗死、冠心病、心絞痛等。 脂質(zhì)體是一種定向藥物載體，屬于靶向給藥系統(tǒng)的一種新劑型，具有增加藥物溶解度、增強(qiáng)藥物的靶向性及降低毒性等優(yōu)點(diǎn)。脂質(zhì)體前體是指經(jīng)噴霧

3、干燥、凍干后以固態(tài)形式存在的脂質(zhì)體分散系，在臨用前加入分散介質(zhì)即可再分散形成脂質(zhì)體。采用脂質(zhì)體技術(shù)制備的燈盞花素脂質(zhì)體前體可以顯著提高其口服生物利用度，有可能提高療效。本研究擬觀察燈盞花素脂質(zhì)體前體對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，并對(duì)燈盞花素脂質(zhì)體前體進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。 實(shí)驗(yàn)方法: 1.SD大鼠腦缺血再灌注模型制備和神經(jīng)評(píng)分 參照Longa線栓法制作大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注動(dòng)物模型，大鼠清醒之后按Longa4分法進(jìn)行

4、神經(jīng)功能評(píng)分，1—3分作為缺血再灌注成功樣本入選。 2.腦組織TTC染色 再灌注后4h斷頭取腦，全腦冠狀切成5片，37℃水浴TTC染色，多聚甲醛固定，拍照。 3.用專(zhuān)業(yè)圖像分析軟件ipp6.0計(jì)算腦梗死面積 4.腦含水量測(cè)定 按干濕重法，腦組織含水量(％)=(腦濕重—腦干重)/腦濕重×100％。 5.采用線栓法制備大鼠下腔靜脈血栓模型 水合氯醛麻醉大鼠，開(kāi)腹分離下腔靜脈，與左腎靜脈

5、下方結(jié)扎下腔靜脈。 6.采用FeCl3建立大鼠頸總動(dòng)脈血栓模型 水合氯醛麻醉大鼠，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈2cm，將吸有20ul FeCl3溶液的小片濾紙敷于頸總動(dòng)脈上30min。 7.采用毛細(xì)管法測(cè)定小鼠凝血時(shí)間 8.急性毒性實(shí)驗(yàn) 首先進(jìn)行LD50測(cè)定實(shí)驗(yàn)。但是LD50無(wú)法測(cè)出，接下來(lái)進(jìn)行最大給藥量實(shí)驗(yàn)。 9.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析對(duì)組間差異進(jìn)行統(tǒng)計(jì)

6、學(xué)分析，P<0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1.腦組織梗死面積檢測(cè)結(jié)果 與模型組比較，PS劑量依賴性降低缺血再灌注后腦組織梗死面積，從模型組0.239±0.051分別降至0.141±0.036，和0.113±0.029(P<0.05)。與Bre組比較，PS中劑量組顯著降低了腦梗死面積，從Bre組0.185±0.008降至PS中劑量組0.141±0.036(P<0.05)。 2.腦含水量測(cè)定結(jié)果

7、 與模型組比較，PS能劑量依賴性降低再灌注后腦組織水腫程度，從模型組79.72±0.46分別降至78.68±0.46和78.39±0.19(P<0.05)。 3.大鼠下腔靜脈血栓形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與模型組比較，PS能劑量依賴性降低血栓重量，血栓濕重從模型組27.34±18.06分別降至23.92±20.09和7.46±6.20(P<0.01)；干重從模型組8.42±5.85分別降至7.49±6.30和2.74±1.82

8、(P<0.01)。PS中劑量組與Bre組比較沒(méi)有顯著性差異。 4.大鼠頸動(dòng)脈血栓溶栓實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與模型組比較，PS能劑量依賴性降低血栓重量，從模型組3.00±1.43，分別降至2.38±1.05和1.89±0.86(P<0.05)。 5.小鼠凝血時(shí)間測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與模型組比較給藥組凝血時(shí)間顯著延長(zhǎng)，從模型組59.5±11.3分別延長(zhǎng)至93.5±18.1，115.8±18.6和118.0±17.8(P<0.0

9、1)。與Bre組比較，PS中劑量顯著延長(zhǎng)了凝血時(shí)間(PS中劑量115.8±18.6，n=20 vs Bre93.5±18.1，n=20 P<0.01)。 6.急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 LD50測(cè)定預(yù)試實(shí)驗(yàn)中PS高劑量組(18000mg/kg)，PS中劑量組(9000mg/kg)，PS低劑量組(4500mg/kg)小鼠均沒(méi)有出現(xiàn)死亡，LD50未能測(cè)出。在隨后最大給藥量實(shí)驗(yàn)中，按18000mg/kg劑量一天灌胃兩次(相當(dāng)于臨床劑量

10、2000倍)，14天內(nèi)小鼠行為無(wú)異常，沒(méi)有死亡，給藥后14天進(jìn)行大體解剖未見(jiàn)內(nèi)臟器官異常。 結(jié)論: 燈盞花素脂質(zhì)體前體(PS)能顯著降低大鼠腦組織梗死面積，劑量依賴性的降低腦組織含水量、抑制血栓形成、促進(jìn)血栓溶解；顯著延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間。對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷有明顯抑制作用，并且療效優(yōu)于等劑量燈盞花素片。 急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：給予臨床劑量2000倍(18000mg/kg×2)燈盞花素脂質(zhì)體前體小鼠沒(méi)有出現(xiàn)行為異常