天藍色鏈霉菌stgR基因的調控作用研究.pdf

1、鏈霉菌作為一種典型的土壤細菌，在生長和生理代謝中常常需要面對不同的生長環(huán)境和生存壓力，長期的進化過程形成了一套完整的形態(tài)分化和代謝機制，天藍色鏈霉菌能夠產生十一烷基靈菌紅素(Red)、放線菌紫素(Act)、次甲霉素(Mmy)和CDA(lipopeptide calcium-dependent antibiotic)四種抗生素，是研究鏈霉菌形態(tài)分化和次級代謝過程調控的模式菌。
　　 天藍色鏈霉菌stgR是LTTR(LysR-typ

2、e transcription regulator)家族典型的轉錄調控因子，研究發(fā)現其對基因轉錄具有負調控作用。本文首先通過PCR-targeting的方法對天藍色鏈霉菌進行基因敲除，構建stgR缺失株，采用PCR和Southern blot進行了驗證，同時構建了stgR的高拷貝株以及回補株；stgR缺失株在營養(yǎng)充分的培養(yǎng)基上(MS，R5)，氣生菌絲和孢子的生長大大提前；基礎培養(yǎng)基(SMM)和營養(yǎng)培養(yǎng)基(YEME)上缺失株的抗生素產生時

3、間提前，產量也有一定程度增加。
　　 轉錄水平分析表明，影響這些變化的關鍵性基chpE、actII-orf4和redD的轉錄都得到了不同程度增強?；谖墨I報道，LTTR家族因子對于自身基因表達往往具有反饋調控作用，因此我們構建帶有stgR啟動子(stgRp)的pIJ8630-stgRp啟動子探測質粒，分別導入到野生型和缺失株中，通過Westren blotting實驗，發(fā)現stgRp活性在野生型中要明顯低于缺失株，表明StgR對