天藍色鏈霉菌A3（2）中bldA依賴性突變的遺傳定位及克隆初探.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文天藍色鏈霉菌A3（2）中bldA依賴性突變的遺傳定位及克隆初探姓名：趙麗云申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：陶美鳳20060601天藍色鏈霉菌A3(2)中bldA依賴件突變的遺傳定位及克降初探天藍色鏈霉菌A3(2)d0bldA依賴性突變的遺傳定位及克隆初探摘要bldA編碼天藍色鏈霉菌A3(2)中識別UUA密碼子的tRNA，大部分菌株的營養(yǎng)生長不需要bldA功能。bldA突變菌株中含nA密碼子的

2、抗生素抗性基因、抗生素調(diào)節(jié)基因仍有表達，暗示存在一個替代bldAtRNA翻譯UUA密碼子的機制。天藍色鏈霉菌A3(2)M145菌株發(fā)生了突變，使bldA成為必需基因。將突變基因命名為bldA依賴性突變(bldAdependentmutation，bad一)，其等位基因命名為bad。本研究試圖定位bad一突變，克隆bad基因，揭示替代bldAtRNA翻譯UUA密碼子的途徑。為了遺傳定位bad一突變，以M145和1258等菌株為親本，通過3

3、輪雜交篩選構建了菌株LY3。用LY3與1258雜交，篩選了217株重組子并鑒定其基因型。對217株重組子的基因型進行遺傳分析，將bad一突變定位于天藍色鏈霉菌A3(2)染色體SC03934與SC04659基因之間的758kb區(qū)域。嘗試使用鳥槍法從bad菌株天藍色鏈霉菌A3(2)M600中隨機克隆bad基因。整個鳥槍克隆實驗得到約21，800株轉化子，篩選獲得2株具有KmSApr葉hioR及“光禿”表型的轉化子，PCR檢測表明其中的bld