基于生物酶技術(shù)的黑骨藤皂苷類成分提取工藝及抗炎活性評價研究.pdf

1、黑骨藤是蘿摩科杠柳屬植物西南杠柳（Periploca forrestii Schltr.）的根莖，是貴州特色苗藥。常用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌打損傷、月經(jīng)不調(diào)，骨折等。目前，黑骨藤的研究大部分集中于化學(xué)成分和藥理活性，課題組前期對黑骨藤的研究中發(fā)現(xiàn)黑骨藤抗炎效果與其皂苷類成分有密切聯(lián)系。皂苷類成分的研究包括藥理活性、生物轉(zhuǎn)化、生源合成等，其中，生物轉(zhuǎn)化研究主要集中于對目標(biāo)化合物活性位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)修飾以及提取等方面，將生物轉(zhuǎn)化技術(shù)應(yīng)用于黑骨藤

2、中皂苷類成分的研究有利于對黑骨藤資源的開發(fā)利用。
　　結(jié)合本課題組前期對黑骨藤的研究，該實(shí)驗(yàn)采用生物酶輔助提取的方法提高了黑骨藤中皂苷類成分提取率，并采用響應(yīng)面法對酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化和驗(yàn)證，隨后對酶輔助提取物進(jìn)行了藥效學(xué)考察，并指認(rèn)出黑骨藤中指標(biāo)性成分綠原酸，建立了綠原酸HPLC含量測定方法，具體如下：
　　1采用紫外分光光度法，建立了黑骨藤中皂苷類成分的含量測定方法，借助已建立起來的方法從19種商品酶中篩選出能顯著提高皂苷類

3、成分提取率的復(fù)合酶（纖維素酶和果膠酶），可比傳統(tǒng)提取方式提取出的皂苷類成分提取率多出55％，隨后在單因素考察基礎(chǔ)上結(jié)合Box-Behnken中心組合響應(yīng)面法優(yōu)化酶提取工藝，得出最佳提取條件組合為酶解溫度51.97 oC，pH=3.5，復(fù)合酶用量1.55%，復(fù)合酶配比為果膠酶：纖維素酶=8:2，通過驗(yàn)證和擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)考察結(jié)果顯示良好。該方法為進(jìn)一步更好的利用黑骨藤中的有效成分提供了參考。
　　2建立完全弗氏佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型，對酶輔助

4、提取物與傳統(tǒng)提取方式提取物進(jìn)行藥效學(xué)驗(yàn)證對比考察。該實(shí)驗(yàn)以大鼠踝關(guān)節(jié)直徑和足掌厚度、體重、踝關(guān)節(jié)浸出物PGE2含量、胸腺、腎上腺、脾臟臟器系數(shù)為評價指標(biāo)，對比觀察傳統(tǒng)提取和酶輔助提取出的皂苷類成分對AA大鼠的影響，最終確定酶輔助提取物可有效提高黑骨藤抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥效作用且效果優(yōu)于傳統(tǒng)提取方式提取物，為黑骨藤抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的擴(kuò)大應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。
　　3指認(rèn)出黑骨藤中指標(biāo)性成分綠原酸并確定其為原型入血成分，以綠原酸含量為指標(biāo)