海地瓜總皂苷提取純化工藝及生物活性研究.pdf

1、海洋中蘊涵著豐富的天然資源，是一個巨大的天然藥庫，人類在面臨著各種疑難雜癥、頑固疾病的嚴(yán)重挑戰(zhàn)以及陸地藥源越來越不能滿足人們需求的前提下，海洋寶貴的資源無疑是人類最青睞的選擇，許多國家已經(jīng)越來越重視海洋中天然產(chǎn)物的研究和開發(fā)。我國海域遼闊，海洋物產(chǎn)豐富，并且具有悠久的海洋用藥歷史，擁有天然的優(yōu)勢。為在國際舞臺中爭得一席，發(fā)展海洋藍色藥物對我國來說無疑具有重要戰(zhàn)略意義。海參作為一種食品和藥材，具有很高的保健功能和藥用價值。海參皂苷是海參體

2、內(nèi)的一種次生代謝產(chǎn)物，具有廣泛的生理藥理活性，潛藏了極大的應(yīng)用價值。本文以海地瓜為研究對象，研究了其總皂苷的提取分離純化工藝，并進行了部分藥理學(xué)活性分析，為海地瓜的綜合開發(fā)利用提供理論依據(jù)。
　　 (1)對海地瓜體壁的基本成分進行分析，得出結(jié)果為：水分含量89.64%，蛋白質(zhì)含量7.93%，折合干重達76.54%，總糖含量0.22%，粗脂肪含量0.02%；灰分含量1.76%；氨基酸組成總量達8.22%，除去組成粗蛋白的氨基酸外，

3、還有0.29%的游離氨基酸，其中甘氨酸含量最高，甲硫氨酸含量最低，必需氨基酸有7種，總含量為1.96%，非必需氨基酸有9種，總含量為6.26%，氨基酸組成較為完善，說明海地瓜的營養(yǎng)價值較高，是一種高蛋白低脂肪的食品。此外，以人參皂苷Re為標(biāo)準(zhǔn)對照，香草醛.冰醋酸.高氯酸做為顯色體系，建立海地瓜皂苷含量測定方法，光譜掃描得到了最佳參比波長537 nm，線性回歸方程為y=0.0038x+0.0071，r=0.9996，表明濃度在40～200

4、μg/mL之間與吸光度值呈良好線性關(guān)系，加標(biāo)回收率為101.9%，RSD=4.63%，精密度實驗RSD=1.77%，穩(wěn)定性實驗RSD=3.16%，重復(fù)性實驗RSD=3.15%，說明方法學(xué)各指標(biāo)均符合要求。應(yīng)用該方法來分析不同提取方法及前處理對海地瓜總皂苷的提取效果，結(jié)果表明醇提法提取效果最好，鮮品海地瓜經(jīng)醇提的皂苷得率為0.036%，冷凍干燥處理的干品海地瓜經(jīng)醇提的得率最高，達0.514%。
　　 (2)對海地瓜體壁總皂苷的提取

5、工藝進行優(yōu)化，采用鮮品醇提法。海地瓜總皂苷提取工藝單因素試驗結(jié)果為：乙醇濃度70%，提取溫度70℃，提取時間3h，提取次數(shù)3次，料液比1:2.0 g/mL。海地瓜總皂苷提取工藝響應(yīng)面分析結(jié)果：乙醇濃度為75%，提取溫度為73.5℃，提取時間為165 min，料液比為1:1.8 g/mL，共提取3次。在該條件下重復(fù)實驗3次測得平均皂苷得率為0.0378%。
　　 (3)對海地瓜總皂苷的純化工藝進行探討，比較了三種型號樹脂(D101

6、、AB-8、DM130)對海地瓜粗提液的分離純化效果，篩選出D101大孔樹脂為最合適的樹脂型號，以D101型號大孔樹脂對海地瓜粗提液靜態(tài)吸附一解析工藝進行研究，得出最佳條件為：稱取已處理過的經(jīng)真空抽濾的D101大孔樹脂1.0 g，加入質(zhì)量濃度為4.0 mg/mL樣品液60 mL，放恒溫搖床中(25℃，120 r/min)振蕩吸附90 min，過濾，樹脂用蒸餾水反復(fù)沖洗，真空抽濾，先加入30%乙醇去除雜質(zhì)，過濾，再用60 mL濃度為80%

7、的乙醇進行解析，于恒溫搖床中(25℃，120 r/min)振蕩120 min。所得皂苷純度約為51.4%。以D101型號大孔樹脂對海地瓜粗提液動態(tài)吸附-解析工藝研究，得出最佳條件為：取濃度為3.6 mg/mL海地瓜皂苷粗提液160 mL上柱，上樣流速為2.5 mL/min，依次用140 mL去離子水洗去水溶性雜質(zhì)，140 mL30%乙醇溶液去除雜質(zhì)，150 mL90%乙醇溶液洗脫海地瓜總皂苷，洗脫流速均為1.5mL/min。所得皂苷純度

8、達71.3%。
　　 (4)對海地瓜總皂苷進行溶血試驗和急性毒理試驗，結(jié)果為：海地瓜總皂苷具有極強的溶血性，在終濃度為2.5μg/mL時便開始出現(xiàn)溶血，并隨濃度的增加，溶血率快速上升。而溶血性主要是發(fā)生在前60 min，表明溶血速度很快。小鼠急性毒理試驗結(jié)果為最大耐受劑量為8000 mg·kg-1，在此劑量以下海地瓜總皂苷經(jīng)口服相對安全。試驗表明海地瓜總皂苷不適合用于臨床注射，經(jīng)口服用比較安全。
　　 (5)對海地瓜總皂

9、苷進行抗氧化活性研究.結(jié)果為：海地瓜總皂苷清除O2·-、·OH的能力及其還原力均很弱，但在對小鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化的抑制作用卻表現(xiàn)出較好的效果，對小鼠肝勻漿自發(fā)性脂質(zhì)氧化產(chǎn)生MDA的IC50為20.50 mg/mL，對Fe2+-H2O2誘導(dǎo)小鼠肝勻漿脂質(zhì)氧化產(chǎn)生MDA的IC50為9.37 mg/mL。總體上說海地瓜總皂苷的主要功能并不是用在抗氧化上。
　　 (6)以昆明種小鼠進行動物實驗，研究海地瓜總皂苷對小鼠的抗疲勞、耐缺氧、抗

10、抑郁作用。得出結(jié)果為：中、高劑量組(160、320 mg·d-1·kg-1)具有降低小鼠體重，顯著延長小鼠負重游泳時間的作用；高劑量組能夠有效增加無氧呼吸時對能量物質(zhì)的動員，增加血乳酸量；中、高劑量在小鼠運動恢復(fù)階段清除乳酸的速度明顯較快；海地瓜皂苷不能有效減低血尿素的生成；中、高劑量組皂苷不能增加肝糖原儲備量，反而有降低的效果，高劑量組能增加肌糖原的儲備量；高劑量組同時能夠有效延緩小鼠缺氧窒息時間，有效減少小鼠游泳不動時間；中、高劑量