紅花化學(xué)成分研究與活性評(píng)價(jià).pdf

1、本論文共分四章，各章節(jié)的主要內(nèi)容及研究結(jié)果如下:
　　一、紅花的研究進(jìn)展
　　本部分在對(duì)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行整理的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)地綜述了紅花的地理分布及現(xiàn)狀、植物化學(xué)研究、分析研究、藥理活性研究、毒副作用研究、體內(nèi)過(guò)程研究及臨床應(yīng)用。
　　二、紅花的化學(xué)成分研究
　　采用多種色譜手段（硅膠柱層析、LH-20凝膠柱層析和pre-HPLC色譜等）、光譜學(xué)方法(MS、IR、UV、1D和2D-NMR)結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，從紅花花瓣中分離

2、鑒定了51個(gè)化合物，分別為:hydroxysaffloryellow B(1*)、hydroxysaffloryellow C(2*)、safflomin C(3)、saffloquinoside C(4)、羥基紅花黃色素A(hydroxysaffloryellow A，5)、脫水紅花黃色素B(anhydrosaffloryellow B，6)、6-羥基山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(6-hydroxykaempferol3-O-β-

3、D-glucoside，7)、6-羥基山柰酚-3，6，7-三-O-β-D-葡萄糖苷(6-hydroxykaempferol3，6，7-tri-O-β-D-glucoside，8)、6-羥基山柰酚-3-O-β-蕓香糖苷-6-O-β-D-葡萄糖苷(6-hydroxykaempferol3-O-β-rutinoside-6-O-β-D-glucoside，9)、6-羥基山柰酚-6，7-二-O-β-D-葡萄糖苷(6-hydroxykaempfe

4、rol6，7-di-O-β-D-glucoside，10)、6-羥基山柰酚(6-hydroxykaempferol，11)、山柰酚-3-O-β-D-蕓香糖苷(kaempferol-3-O-βD-rutinoside，12)、山柰酚(kaempferol，13)、kaempferol-3-O-β-D-glucosyl-(1→2)-β-D-glucoside(14)、6-甲氧基山柰酚(6-methoxykaemferol，15)、槲皮素(q

5、uercetin，16)、槲皮素-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷(quercetin-3,7-di-O-β-D-glucoside,17)、芹菜素(apigenin,18)、apigenin-7-O-β-apiofuranosyl-6，8-di-C-β-glucopyranoside(19)、6-羥基芹菜素-6-O-β-D-葡萄糖苷-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(6-hydroxyapigenin6-O-β-D-glucoside-7

6、-O-β-D-glucuronide，20)、5，7，4'-三羥基-6-甲氧基黃酮-3-O-β-D-蕓香糖苷(5，7，4'-trihydroxy-6-methoxyflavone-3-O-β-D-rutinoside，21)、蘆丁(rurin，22)、木犀草素(luteolin，23)、野黃芩素(scutellarein，24)、(2R)-5，4'-dihydroxyl-6，7-di-O-β-D-glucopyranosyl flava

7、none(25)、棕櫚酸(palmitic acid，26)、十一烷酸(undecanoic acid，27)、正二十六烷酸(hexacosanoic acid，28)、(2S)-1-O-heptatriacontanoyl glycerol(29)、1-hexadecanoyl propan-2，3-diol(30)、4-二甲基庚二酸(4-dimethyl heptanedioic，31)、n-tetratriacont-20，23-

8、dienoic acid(32)。三萜酸類化合物1個(gè)，為熊果酸(ursolic acid,33)。酚酸類化合物有10個(gè)，分別為香草酸(vanillic acid,34)、對(duì)羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoicacid，35)、對(duì)羥基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde，36)、對(duì)羥基苯乙酮(p-hydroxyacetophenone，37)、沒(méi)食子酸(gallic acid，38)、迷迭香酸(rosmarinic

9、acid,39)、原兒茶酸(protocatechuic acid，40)、tetrephthalic acid mono-[2-(4-carboxy-phenoxycarbonyl)-vinyl] ester(41)、紫丁香苷(syringing，42)、反式-1-（4'-羥基苯基）-丁-1-烯-3-酮(E-l-(4'-hydroxypheny)-but-1-en-3-one，43)。2個(gè)香豆素類化合物，七葉亭(esculetin，4

10、4)和東莨菪內(nèi)酯(scopoletin,45)。1個(gè)神經(jīng)酰胺類化合物，2-hydroxy-N-[(3S,4R，5R)-tetrahydro-4-hydroxy-5-(4Z)-4-tetradecenyl-3-furanyl]-，(2S)-rel-(9CI)(46*)。4個(gè)甾醇類化合物，它們分別是β-谷甾醇(β-sitosterol，47)、胡蘿卜苷(daucosterol，48)、豆甾醇(stigmasterol，49)和檸黃醇(cit

11、rostadienol，50)。另外還有1個(gè)生物堿類化合物，異光黃素(isolumichrome，51)。在上述51個(gè)化合物中，化合物1，2和46為新化合物，化合物14，31，32和41為首次從紅花屬植物中分離得到，化合物21，28，29，30，33，34，38，44，45和50為首次從紅花中分離得到。
　　三、紅花的藥理活性研究
　?。ㄒ唬┘t花不同分離部位的藥理活性評(píng)價(jià)
　　采用皮下注射鹽酸腎上腺素和冰水游泳聯(lián)合復(fù)制

12、急性血瘀大鼠模型。和正常組比較，模型組大鼠的WBV、PV、TXB2和FIB明顯升高，APTT、PT、TT、ADP和6-K-PGF1α均顯著降低，子宮可見(jiàn)嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)，證明模型成功復(fù)制。和模型組比較，各給藥組均有不同程度的改善，其中4倍臨床等效量紅花除PV和PT外，其余各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均有顯著差異(P＜0.05或P＜0.01)，子宮內(nèi)膜較完整，炎癥較輕，表明4倍臨床等效量紅花能明顯改善模型大鼠的血液流變學(xué)和凝血功能異常，并發(fā)揮保護(hù)子宮的作用

13、。采用DPPH自由基清除法和還原Fe3+法綜合評(píng)價(jià)紅花不同分離部位的體外抗氧化活性，結(jié)果顯示，在測(cè)定濃度范圍內(nèi)，各部位均具有一定的抗氧化活性，并存在濃度依耐性，抗氧化能力隨著濃度的增加而提高。其中水部位表現(xiàn)出較強(qiáng)的活性，而乙酸乙酯部位抗氧化的能力僅次于水部位，石油醚部位抗氧化活性最弱。
　?。ǘ┘t花單體化合物的藥理活性
　　綜合采用DPPH和ABTS自由基清除法及還原Fe3+法篩選紅花花瓣系統(tǒng)分離得到的部分單體化合物體外抗

14、氧化活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脂肪酸類、甾醇類以及部分有機(jī)酸類成分無(wú)清除自由基和還原Fe3+的活性，故石油醚部位抗氧化活性最弱。黃酮類化合物清除自由的活性與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，C2-C3鍵被氫化及A環(huán)羥基糖苷化可顯著降低清除自由基的活性，而C環(huán)3-OH的糖苷化尤其是單糖苷是有利的。醌式查爾酮苷類化合物清除自由基的活性與本身含有羥基數(shù)目呈正相關(guān)。對(duì)還原Fe3+的活性而言，含鄰苯三酚樣結(jié)構(gòu)化合物有利于形成穩(wěn)定的Fe3+絡(luò)合物，如化合物7，24和38，而醌

15、式查爾酮苷類化合物具有3-羥基-4-羥基和5-羥基-7-羰基的結(jié)構(gòu)，易與Fe3+絡(luò)合，其還原Fe3+的能力也相對(duì)較強(qiáng)。
　　四、紅花主要活性成分脫水紅花黃色素B(AHSYB)體內(nèi)過(guò)程研究
　　建立AHSYB在大鼠血漿中的UFLC-MS/MS測(cè)定方法，研究正常大鼠灌胃和尾靜脈注射AHSYB后的藥動(dòng)學(xué)特性并比較正常和模型大鼠灌胃AHSYB后的藥動(dòng)學(xué)行為差異。灌胃和尾靜脈注射AHSYB的劑量分別為30 mg·kg-1和2.5 mg

16、·kg-1。血漿中AHSYB(25-10000ng·mL-1)線性關(guān)系良好，日間和日內(nèi)精密度均小于6.5％，準(zhǔn)確度的相對(duì)誤差在±9.4％范圍內(nèi)。AHSYB在正常和模型大鼠中吸收較快且半衰期均較短，在6小時(shí)內(nèi)消除達(dá)90％;生物利用度均較低，分別為0.3％和0.17％;正常和模型大鼠的T1/2和Tmax并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在模型大鼠中的AUC0-t、AUC0-∞和F均顯著低于正常大鼠(P＜0.05)。提示，在病理狀態(tài)下，AHSYB在體內(nèi)的吸收和