熱補(bǔ)針法針刺對(duì)RA寒證模型家兔血液代謝物影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：運(yùn)用代謝組學(xué)的技術(shù)和方法，觀察熱補(bǔ)針法調(diào)節(jié)RA寒證模型家兔血液代謝物的表達(dá)變化，探討熱補(bǔ)針法治療RA的相對(duì)特異性機(jī)制。
　　方法：40只健康清潔級(jí)青紫藍(lán)家兔隨機(jī)分為正常組、模型組、平補(bǔ)平瀉組、捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法組、熱補(bǔ)針法組，各8只。以卵蛋白誘導(dǎo)配合低溫冷凍法制備RA寒證模型，除正常組、模型組外，其余各組分別于雙側(cè)足三里穴施以平補(bǔ)平瀉法、捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法與熱補(bǔ)針法針刺，1次/日，留針30min/次，共7次。觀察各組家兔一般狀況，測(cè)定痛閾、關(guān)節(jié)

2、腫脹度，觀察滑膜病理學(xué)改變、統(tǒng)計(jì)病理積分，制備血清，對(duì)血清進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)技術(shù)檢測(cè)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析（PCA）、偏最小二乘法－判別分析（PLS-DA），通過變量重要性投影值（VIP>1）和P值（P＜0.05）篩選出血清中的差異代謝物。
　　結(jié)果：
　　1.家兔一般狀況的變化
　　正常組家兔飲食、飲水、活動(dòng)等均無任何異常改變；模型組家兔蜷縮，精神狀態(tài)較差，體毛雜亂、不光澤，活動(dòng)量減少，飲食、飲水量均減少，膝

3、關(guān)節(jié)腫脹，觸之出現(xiàn)躲避行為，膝關(guān)節(jié)局部皮膚冰冷；各針刺組精神狀態(tài)、活動(dòng)量、關(guān)節(jié)腫脹度等較模型組均明顯改善。
　　2.家兔痛閾值的變化
　　模型組家兔痛閾明顯低于正常組（P＜0.05）；各針刺組家兔痛閾均高于模型組（均P＜0.05）；熱補(bǔ)針法組家兔痛閾高于平補(bǔ)平瀉組和捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法組（均P＜0.05）。
　　3.家兔膝關(guān)節(jié)周徑的變化
　　模型組家兔膝關(guān)節(jié)周徑大于正常組（P＜0.05）；各針刺組家兔膝關(guān)節(jié)周徑均小于模型組（

4、均P＜0.05）；熱補(bǔ)針法組膝關(guān)節(jié)周徑與平補(bǔ)平瀉組和捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法組比較沒有顯著差異（均P＞0.05）。
　　4.家兔滑膜組織形態(tài)學(xué)和病理積分變化
　　正常組：滑膜細(xì)胞排列整齊，無增生腫大，未發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜基質(zhì)無增殖。模型組：滑膜被覆細(xì)胞增生腫大嚴(yán)重，巨細(xì)胞、淋巴細(xì)胞常見，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，滑膜基質(zhì)增生顯著。平補(bǔ)平瀉組和捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法組：滑膜細(xì)胞增生較模型組減少，有少許巨細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，炎性細(xì)胞中度浸潤(rùn)，中度滑膜基質(zhì)增生。熱補(bǔ)針

5、法組：滑膜被覆細(xì)胞增生腫大程度明顯減輕，罕見巨細(xì)胞，炎性細(xì)胞輕度浸潤(rùn)，有輕度滑膜基質(zhì)增生。
　　模型組家兔膝關(guān)節(jié)滑膜組織病理積分明顯高于正常組、平補(bǔ)平瀉組、捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法組和熱補(bǔ)針法組（均P＜0.05）；各針刺組滑膜組織病理積分均顯著低于模型組（均P＜0.05）；熱補(bǔ)針法組滑膜組織病理積分明顯低于平補(bǔ)平瀉組和捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法組（均P＜0.05）。
　　5.主成分分析（PCA）結(jié)果
　　從PCA得分圖中可以看出各組聚類明顯，說明五組樣

6、本有明顯差異，各針刺組有沿t[1]軸回歸正常組的趨勢(shì)，并且熱補(bǔ)針法組最明顯。
　　6.偏最小二乘法－判別分析（PLS-DA）結(jié)果
　　模型組家兔血液代謝物變化較正常組主要體現(xiàn)于肉堿、溶血性磷脂酰膽堿（LysoPC(14:0)）、LysoPC(18:3)、溶血性磷脂酰乙醇胺（LysoPE(0:0/20:5)）、LysoPE(0:0/22:1)、癸酸、硬脂酸以及乳酸的含量均升高，亮氨酸、纈氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、焦谷氨酸、α－酮

7、戊二酸、琥珀酸、延胡索酸、蘋果酸、半乳糖、甘露糖的含量均降低，上述代謝物具體涉及到脂肪酸、氨基酸、三羧酸循環(huán)以及糖類代謝。各針刺組上述代謝物均出現(xiàn)回調(diào)，熱補(bǔ)針法組對(duì)RA寒證模型家兔三羧酸循環(huán)與糖代謝的回調(diào)作用均明顯優(yōu)于平補(bǔ)平瀉組和捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法組。
　　結(jié)論：
　　1.熱補(bǔ)針法對(duì)RA寒證模型家兔具有相對(duì)特異性治療作用；
　　2.熱補(bǔ)針法能相對(duì)特異性改善RA寒證模型家兔的病理形態(tài)、降低滑膜組織病理積分；
　　3.熱補(bǔ)針法