無(wú)機(jī)砷及其代謝物對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞毒性作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)人真皮成纖維細(xì)胞，用無(wú)機(jī)砷及其代謝物進(jìn)行染毒，觀察染毒后細(xì)胞增殖、周期及凋亡，并檢測(cè)DNA修復(fù)相關(guān)的XPA、XPC、PARP1、ERCC3基因的表達(dá)變化，探討砷及其代謝物導(dǎo)致細(xì)胞皮膚損傷的分子機(jī)制。
　　方法：1、從6～10歲的8例健康兒童志愿者中，取包皮組織進(jìn)行原代培養(yǎng)、分離人真皮成纖維細(xì)胞(Fibroblast)。傳代培養(yǎng)至第10代后，分別以無(wú)機(jī)砷化合物亞砷酸鈉(Sodiumarsenate，Na2AsO2)、二

2、甲基胂酸(Dimethylarsinic arsenical，DMAⅤ)、單甲基胂酸(Monomethylated arsenical，MMAⅢ)進(jìn)行染毒，混勻分為4組，即高、中、低、對(duì)照組。在72 h后，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞增殖，檢測(cè)不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII(0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、25μmol/L)對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞體外增殖的變化。2、流式細(xì)胞儀(Flo

3、w cytometer)檢測(cè)不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII(0μmol/L、5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L)刺激人真皮成纖維細(xì)胞的凋亡和周期變化狀況。3、通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量(Real-Time Quantitative PCR)檢測(cè)不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII(0μmol/L、5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L)刺激人真皮成纖維細(xì)胞后，修復(fù)基因XPA、XPC、PARP1

4、、ERCC3的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1、人真皮成纖維細(xì)胞通過(guò)MTT比色法檢測(cè)得出結(jié)果：和對(duì)照組對(duì)比，人真皮成纖維細(xì)胞經(jīng)不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII刺激后，吸光度值發(fā)生變化，存在劑量-反應(yīng)關(guān)系(P<0.05)；2、用0μmol/L、5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L的iAsIII、DMAV、MMAIII的濃度作用人真皮成纖維細(xì)胞，G0/G1期細(xì)胞比例明顯下降(P<0.05)，G2/M期和S期細(xì)胞比例

5、較對(duì)照組明顯增加(P<0.05)；高、中劑量iAsIII、DMAV、MMAIII處理組細(xì)胞G1期細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)增多，提示細(xì)胞在G1期出現(xiàn)阻滯的趨勢(shì)，G2和S期細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)較少。3、XPA、XPC、PARP1、ERCC3在iAsIII、DMAV、MMAIII藥物作用下，mRNA在0~10μmol/L濃度的表達(dá)量出現(xiàn)上升趨勢(shì)，而隨著iAsIII、DMAV、MMAIII藥物作用濃度的增加，在15~25μmol/L濃度的mRNA表達(dá)量顯示有下

6、降趨勢(shì)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：在細(xì)胞增殖試驗(yàn)中，不同濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII誘導(dǎo)人真皮成纖維細(xì)胞后，吸光度產(chǎn)生了明顯的變化，0~10μmol/L濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞有促進(jìn)細(xì)胞增殖作用，而15~25μmol/L濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞有抑制細(xì)胞增殖作用。0~10μmol/L濃度的iAsIII、DMAV、MMAIII對(duì)人真