質譜技術對尿液和羊水代謝物的分析.pdf

1、目的：運用質譜技術分析尿液和羊水代謝物。建立氣相色譜-質譜檢測新生兒尿液中類固醇激素方法，以應用于先天性腎上腺皮質增生癥等類固醇激素代謝異常相關疾病的診斷和鑒別診斷；運用氣相色譜-質譜和串聯(lián)質譜建立羊水中有機酸代謝物、?；鈮A和氨基酸的參考值，為有機酸血癥的羊水產(chǎn)前診斷提供依據(jù)。 方法：①建立氣相色譜-質譜檢測尿液中類固醇激素的方法：尿液首先用固相萃取柱萃取游離型和結合型類固醇激素，然后經(jīng)β-葡萄糖醛酸苷酶和硫酸酯酶水解，再次用

2、固相萃取柱萃取游離型類固醇激素，加入內標，吹干并經(jīng)兩次衍生后采用氣相色譜-質譜檢測分析。以上述方法檢測10例正常新生兒和5例來自新生兒疾病篩查中心的先天性腎上腺皮質增生癥患兒。②收集新華醫(yī)院產(chǎn)前篩查孕婦羊水共63例。采用氣相色譜-質譜檢測分析其有機酸代謝物：羊水經(jīng)尿素酶水解，乙酸乙酯萃取，雙三甲基硅基三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷衍生后上樣分析；采用串聯(lián)質譜檢測分析羊水中氨基酸和?；鈮A：將羊水滴于濾紙片上，取直徑3mm的羊水濾紙片4片，經(jīng)含

3、?；鈮A和氨基酸同位素內標的甲醇萃取，鹽酸正丁醇衍生后上樣分析。所有樣本按照孕周：18孕周之前和18孕周之后分為兩組，對兩組中每一種化合物進行了Mann-Whitney U檢驗。所有樣本按照年齡：35歲之前和35歲之后分為兩組，對兩組中每一種化合物進行了Mann-Whitney U檢驗。通過統(tǒng)計分析建立羊水中有機酸代謝物、氨基酸和?；鈮A參考值。 結果：⑴氣相色譜-質譜檢測尿液中的3種類固醇激素17-HP、16α-OH-DHEA

4、和6α-OH-THA的相關系數(shù)在0.9876~0.9997之間，相對標準偏差均＜9.2％，回收率在91％~111％之間。10例正常新生兒尿液的17-HP、16α-OH-DHEA和6α-OH-THA水平分別是102±8.98、30080±44.21和203±16.36 μg/g Creat。5例先天性腎上腺皮質增生癥患兒尿液的17-HP、16α-OH-DHEA和6α-OH-THA水平分別是8624±36.23，70002±26.51和7±

5、6.26 μg/g Creat；氣相色譜-質譜檢測先天性腎上腺皮質增生癥患兒3種類固醇激素水平和正常新生兒有顯著性差異。⑵氣相色譜-質譜檢測羊水中131種有機酸代謝物并建立了參考值；串聯(lián)質譜檢測羊水中8種?；鈮A和12種氨基酸并建立了參考值。 結論：①氣相色譜-質譜技術進行尿液類固醇激素分析，有較高的回收率，能夠達到較高的精確性。建立了檢測尿液類固醇激素的方法，能夠明確區(qū)分正常新生兒和先天性腎上腺皮質增生癥患兒，對臨床鑒別診斷有